Terapêutica no cancro do cólon e recto: contribuição da via de sinalização APC/β-catenina/TCF7L2

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Gonçalves, Neuza Catarina Rocha, 1987-
Data de Publicação: 2010
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/8758
Resumo: Tese de mestrado em Bioquímica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2010
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spelling Terapêutica no cancro do cólon e recto: contribuição da via de sinalização APC/β-catenina/TCF7L2BioquímicaTeses de mestrado - 2010Tese de mestrado em Bioquímica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2010A via Wnt canónica ou via de sinalização APC/β-catenina/TCF7L2 encontra-se desregulada na maioria dos cancros do cólon e recto (CCR), assumindo por isso um papel crucial no desenvolvimento tumoral. Em estudos preliminares esta via foi correlacionada com a resposta à terapêutica, tendo sido observada maior resistência ao tratamento para níveis de sinalização mais elevados. Sabe-se que, diferentes mutações no gene APC, que originam a expressão de um número diferente de domínios de regulação da β-catenina, resultam em diferentes níveis de sinalização Wnt. Assim, o presente estudo teve como principal objectivo estudar a contribuição de alterações genéticas na via de sinalização APC/β-catenina/TCF7L2 para a terapêutica no CCR. Numa primeira fase foram estudadas diferentes mutações no gene APC e numa segunda fase a perda de função do gene TCF7L2. Com esta finalidade, foi estudada a citotoxicidade de diferentes concentrações dos fármacos 5-FU, oxaliplatina, irinotecano e diferentes combinações destes nas linhas celulares de CCR HT29 e SW480, as quais apresentam mutações no APC que conduzem a diferentes níveis de activação da via Wnt. Também foi estudado o efeito de três mutações no gene APC, que resultam em proteínas truncadas que retêm três, um ou nenhum domínio de regulação da β-catenina (proteínas truncadas, codões 1-1556, 1-1309 e 1-932, respectivamente), na resistência aos referidos fármacos. O efeito destes foi avaliado através de ensaios de viabilidade e de proliferação celular. Foi ainda estudada a perda de heterozigotia (LOH) do TCF7L2 em 57 amostras de CCR, a qual foi correlacionada com a presença de metástases (estadiamento TNM, M0 ou M1). Esta associação foi também analisada, in vitro, através de ensaios de invasão e migração após inibição do TCF7L2. Os resultados do presente estudo mostraram que o efeito de três mutações no gene APC, que conferem níveis de sinalização reduzidos, intermédios e elevados, APC 1-1556, 1-1309 e 1-932, respectivamente, não resulta num aumento da resistência à terapêutica de forma igualmente crescente. De acordo, no tratamento com 5-FU a melhor resposta (diminuição da viabilidade celular) foi obtida para níveis de sinalização intermédios (1-1309), seguida da proteína 1-1556 e, finalmente, da 1-932 que apresentou a pior resposta. No caso da oxaliplatina, as diferenças de viabilidade entre as três proteínas não foram significativas, apesar do comportamento ser diferente entre concentrações reduzidas e elevadas de fármaco. Com o irinotecano, observou-se que a proteína 1-1556 originou uma melhor resposta, seguida da 1-932 e por último da 1-1309. Na segunda fase deste estudo, foi identificada LOH do gene TCF7L2 em 13/44 (30%) amostras de CCR. A presença de LOH foi significativamente mais frequente nos tumores de indivíduos que apresentavam metástases (M1) do que nos tumores de indivíduos que não apresentavam metástases (M0) [9/16 (56%) vs. 6/50 (12%), p<10-3]. Adicionalmente, a inibição da expressão do TCF7L2, in vitro, resultou num aumento da invasão e especialmente da migração. Concluiu-se que, diferentes mutações no gene APC, que conferem diferentes níveis de sinalização da via Wnt, parecem resultar em diferentes respostas ao tratamento do CCR, as quais são dependentes do fármaco e concentração utilizados. Também se concluiu que a LOH do TCF7L2 se encontra significativamente associada à metastização (estadio M1). Sugere-se que a activação do HGF pela inibição do TCF7L2, recentemente descrita, possa tornar a via HGF/MET num alvo terapêutico promissor em doentes com LOH do gene TCF7L2. Em conjunto, este estudo sugere que para além do papel determinante na iniciação tumoral, a via de sinalização Wnt, poderá ser um dos mecanismos determinantes numa fase mais tardia da tumorigénese assim como na resposta à terapêutica.The Wnt canonic pathway or APC/β-catenin/TCF7L2 signaling pathway is deregulated in the majority of colorectal cancers (CRC) and molecular alterations in this pathway are rate-limiting for tumor development. In previous studies this pathway was correlated with the response to chemotherapy, as high signaling activities were associated with an increased resistance to treatment. It is well known that different APC gene mutations, which lead to the expression of truncated proteins retaining different numbers of β-catenin regulatory domains, result in different levels of Wnt signaling. Thus, the main aim of the present study was to evaluate the contribution of genetic alterations in the APC/β-catenin/TCF7L2 pathway for CRC therapy. This study consisted in two parts, the first was centered in the effect of different APC gene mutations in chemotherapy response and the second was focused in the TCF7L2 loss of function. The citotoxicity of different concentrations and combinations of the drugs, 5-FU, oxaliplatin and irinotecan, was studied in the CRC cell lines SW480 and HT29, which present APC mutations leading to different levels of Wnt signaling activation. On the other hand, the effect, in the resistance to the same drugs, exhibited by three different APC mutations, resulting in truncated proteins that retain three, one or none β-catenin regulatory domains (codons 1-1556, 1-1309 and 1-932, respectively), was also studied. The effect of the drugs was evaluated by viability and proliferation assays. The analysis of loss of heterozygosity (LOH) of TCF7L2 was studied in 57 CRC samples and its correlation with the presence of metastasis (M1 or M0, TNM staging) was also evaluated. This association was also analyzed in vitro by invasion and migration assays following TCF7L2 inhibition. The results of the present study show that the effect of the three APC gene mutations , leading to reduced, intermediate and high Wnt signaling levels (APC 1-1556, 1-1309 and 1-932,, respectively) does not result in an increase of resistance to treatment in the same order. In agreement, when using 5-FU treatment, a better response (reduction of cell viability) was obtained for medium signaling levels (APC 1-1309), followed by APC 1-1556 and finally by 1-932. For oxaliplatin, the differences in cell viability between the three truncated proteins were not significant, although some differences were found between low and high drug concentrations. When the cell lines were treated with irinotecan, a better response was observed for APC 1-1556, followed by APC 1-932 and at last by APC 1-1309. In the second part of this study, TCF7L2 LOH was identified in 13/44 (30%) of CCR samples. The presence of LOH was significantly more frequent in the tumors from individuals with metastasis (M1) than in the tumors from individuals that did not presented metastasis (M0) [9/16 (56%) vs. 6/50 (12%), p<10-3]. Additionally, the inhibition of TCF7L2 expression, in vitro, resulted in the increase of invasion and especially of migration.Albuquerque, CristinaCyrne, Luísa, 1954-Repositório da Universidade de LisboaGonçalves, Neuza Catarina Rocha, 1987-2013-07-09T10:17:11Z20102010-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/8758porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T15:52:42Zoai:repositorio.ul.pt:10451/8758Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:33:09.231576Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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