Resistência a antibióticos, factores de virulência e grupos filogenéticos em Encherichia coli produtora de ß-lactamases de amplo espectro de frangos para consumo

• Autor(a) principal: Costa, Manuel Luís Rodrigues da
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/2912
• topic: Escherichia coli; Resistência; Antibióticos; BLAE; Carne de frango

O desenvolvimento da resistência aos antibióticos tem sido reconhecido como um grave problema de Saúde Pública. A comunidade científica reconhece a necessidade de realizar a avaliação da susceptibilidade aos antibióticos em “bactérias indicadoras” (como Escherichia coli) de diversas origens, tendo em vista o combate o aumento da resistência antimicrobiana. A microflora bacteriana intestinal dos animais de consumo, assim como os seus produtos constituem ambientes favoráveis para a sobrevivência, transferência e disseminação de bactérias resistentes. O principal objectivo deste trabalho consistiu em estudar a taxa de resistência a antibióticos em isolados de E. coli produtoras de β-lactamases de amplo espectro (BLAE) de carne de frango destinada a consumo humano, detectar factores de virulência e analisar os grupos filogenéticos dos isolados de E. coli. Um total de 29 amostras de frango (6 de asas, 6 de peito, 6 de coxas 5 de moelas e 6 de pele) foram semeadas em Levine não suplementado com cefotaxima e Levine com suplemento de cefotaxima (2μg/ml). Testou-se a susceptibilidade a 16 antibióticos (ampicilina; amoxicilina + ácido clavulânico; cefotaxima; cefoxitina; ceftazidima; aztreonam; imipenemo; gentamicina; amicacina; tobramicina; estreptomicina; ácido nalidíxico; ciprofloxacina; sulfametoxazol-trimetropim; tetraciclina e cloranfenicol) pelo método da difusão em disco de acordo com as normas do CLSI. Obtiveram-se 29 isolados (100%) de E. coli das placas de Levine não suplementado com cefotaxima e, 27 isolados (93,1%) de E. coli das placas de Levine suplementadas. Dos 27 isolados obtidos de placas de Levine suplementado com cefotaxima (2μg/ml), verificou-se que 23 dos isolados (85,2%) eram produtores de β-lactamases de amplo espectro (BLAE) e que 4 dos isolados (14,8%) não foram produtores deste tipo de enzimas (negativos para o teste de detecção fenotípica de BLAEs). Os isolados de E. coli obtidos de meios não suplementados com cefotaxima apresentaram uma elevada percentagem de resistência à tetraciclina (72,4%), à ampicilina, ao ácido nalidíxico (65,5%), ao cloranfenicol, à ciprofloxacina (34,5%), ao sulfametoxazol-trimetropim (27,6%) e à estreptomicina (27,6%). Dos 23 isolados BLAE, 13 manifestaram a presença do gene blaTEM-52, 4 a presença do gene blaCTX-M-14a, quatro a presença do gene blaCTX-M-9 e 2 a presença do gene blaCTX-M-1. O gene tetA ou tetB foi encontrado nos 17 isolados resistentes à tetraciclina. Dos 13 isolados resistentes ao sulfametoxazol-trimetropim, 12 manifestaram a presença do gene sul2, 4 a presença do gene sul1 (os quatro em combinação com o gene sul2) e 1 a presença do gene sul3. O gene aadA foi encontrado em oito dos 11 isolados resistentes à estreptomicina. O gene aac(3)-II foi encontrado nos 4 isolados resistentes à gentamicina. No isolado resistente ao cloranfenicol foi detectado o gene cmlA. Os genes gyrA e parC foram amplificados e posteriormente sequenciados nos isolados resistentes às quinolonas. Nos 20 isolados resistentes ao ácido nalidíxico foram identificadas duas alterações aminoacídicas no gene gyrA (S83L+D87N). Os 10 isolados resistentes à ciprofloxacina possuíam o gene parC com uma mutação no tripleto 80 que causa alteração aminoacídica (S80I). Nos 4 isolados obtidos de placas de Levine com suplemento de cefotaxima, que evidenciaram resultado negativo para o teste de detecção fenotípica de BLAEs, foram detectadas mutações pontuais na região promotora/atenuadora do gene ampC nas posições -42; -18; -1; +58. O gene aadA foi encontrado nos 4 isolados resistentes à estreptomicina. Os 4 isolados resistentes ao sulfametoxazol-trimetropim manifestaram o gene sul1. O gene tetA foi encontrado nos 2 isolados resistentes à tetraciclina. O gene aac(3)-II foi encontrado nos 2 isolados resistentes à gentamicina. Nos 2 isolados resistentes ao ácido nalidíxico foram identificadas duas alterações aminoacídicas no gene gyrA (S83L+D87N). Dos 27 isolados provenientes de placas de Levine com suplemento de cefotaxima, a pesquisa de factores de virulência evidenciou a presença do gene aer em 74,1% dos isolados, o gene fimA em 40,7% e o gene papC em 7,4% dos isolados. Detectou-se o gene intl1 em 8 isolados e o gene intl2 em 4 isolados. Dos 27 isolados provenientes de placas de Levine com suplemento de cefotaxima, 5 pertenceram ao grupo filogenético A, 11 ao grupo filogenético B1, 3 ao grupo filogenético B2 e 8 ao grupo filogenético D. Foi nosso intuito caracterizar, em todas as estirpes provenientes de placas de Levine suplementadas com cefotaxima, os mecanismos envolvidos na resistência fenotípica aos antibióticos, bem como descrever os possíveis elementos de aquisição e disseminação destes genes. Por último, referir que os dados obtidos neste estudo são importantes para estabelecer políticas de uso prudente de antibióticos em animais de consumo, bem como em humanos. De salientar a importância de continuar estudos de vigilância da resistência aos antibióticos, tendo em vista a evolução da resistência no tempo, em diferentes nichos, assim como o estudo de factores que influenciam a sua selecção e disseminação.