Caracterização preliminar de vírus de carraças tendo por base a amplificação dirigida versus amplificação não-dirigida de sequências genómicas virais

• Autor(a) principal: FIGUEIRA, Lúcia Maria Alves
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/20027
• topic: Ciências biomédicas; Biologia molecular; Virologia; Carraças; Caracterização filogenética; Ixodídeos; Phlebovirus; Thogotovirus; Caracterização filogenética; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

Globalmente, os ixodídeos são considerados o segundo vetor artrópode com maior importância em Saúde Pública, sendo considerável o aumento na incidência e distribuição geográfica de vírus transmitidos por estes. O número crescente de estudos direcionados para a identificação de novos vírus transmitidos por carraças, tem vindo a ser motivado por descobertas recentes de vírus patogénicos e altamente virulentos transmitidos por estes artrópodes, sendo destes exemplos, os vírus Bourbon, Several Fever with Thrombocytopenia Syndrome e Heartland. O facto de diversas espécies de carraças terem demonstrado albergar uma série de potenciais novos vírus desconhecidos, aliado à limitação no conhecimento relativo à distribuição de vírus transmitidos por carraças em Portugal, motivou o presente trabalho, que incluiu a identificação e caracterização preliminar de vírus presentes em carraças colhidas no nosso país. Os exemplares em estudo foram coletados da vegetação em vários locais dos distritos de Lisboa e Setúbal, e analisados utilizando duas abordagens distintas, uma delas dependente e a outra independente de um conhecimento prévio das sequências que viríamos a amplificar. As abordagens de heminested-, e multiplex-PCR, utilizando primers degenerados, foram dirigidas para dois géneros distintos Thogotovirus e Phlebovirus, cuja circulação em Portugal já fora anteriormente comprovada. Adicionalmente, foi efetuada em macerados de carraças uma abordagem de amplificação não-dirigida utilizando a técnica Sequence - Independent Single Primer Amplification. Das várias abordagens utilizadas neste estudo, a técnica de multiplex- PCR dirigida para o segmento L do genoma viral de Phlebovirus, foi notoriamente a que apresentou melhores resultados, tendo um grande número de pools revelado a presença dessas sequências virais. A análise filogenética das sequências virais obtidas revelou a segregação aparente em duas linhagens distintas de flebovírus. Os vírus detetados, sob as condições utilizadas, não conseguiram replicar em células Vero E6 e DH82. O isolamento e caracterização mais aprofundada destes vírus, bem como o seu eventual impacto na saúde humana/animal justificam, futuramente novos estudos.