Epi-drugs regulate H2A.Z via SIRT1 upregulation in prostate cancer

• Autor(a) principal: Baptista, Tiago Daniel Fidalgo
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/11570
• topic: Bioquímica clínica; Medicamentos; Cancro da próstata

As actuais abordagens terapêuticas para cancro de próstata (PCa) avançado são limitadas e ineficazes. Uma vez que as aberrações epigenéticas são muito comuns em PCa, o uso terapêutico de fármacos epigenéticos pode ser uma alternativa viável. A variante de histona H2A.Z e sua forma acetilada têm sido associadas com a activação de oncogenes em células de PCa, devido à sua localização perto do TSS. Assim, objetivou-se avaliar o efeito de fármacos epigenéticos na regulação da expressão da variante H2A.Z. Três linhas celulares de PCa (LNCaP, DU145 e PC-3) foram tratadas com 5-aza-2'-desoxicitidina (DAC) e tricostatina A (TSA). Os níveis de transcripto e proteína dos genes H2AFZ e SIRT1 foram avaliados por qRT-PCR e Western Blot, respectivamente. ChIP foi realizado para avaliar em que medida o tratamento alterava o padrão de marcas de histonas. Subsequentemente, a exposição a nicotinamida e resveratrol, um inibidor e um indutor de actividade sirtuina 1, respectivamente, foi realizada para avaliar o papel da sirtuina 1 nos níveis H2A.Z. Além disso, um ensaio de ligação proximal (PLA) foi realizado para avaliar a capacidade dos farmacos epigenéticos em regular a interacção entre a sirtuina 1 e a H2A.Z. O tratamento com TSA, sozinho ou combinado com DAC, levou a um aumento dos níveis de transcripto do gene H2AFZ, embora com uma simultânea diminuição dos níveis de proteína. Por outro lado, os níveis de transcripto e de proteína do gene SIRT1 aumentaram após a exposição aos fármacos. O ChIP revelou um aumento de marcas de activação da transcrição na região do TSS para ambos os genes. Surpreendentemente, após a inibição da sirtuina 1, níveis H2A.Z aumentaram abruptamente, enquanto que a indução da sirtuina 1 levou a uma queda abrupta nos níveis de H2A.Z. Finalmente, os resultados de PLA mostraram que os fármacos epigenéticos favorecem a interacção entre as duas proteínas estudadas. Embora os fármacos epigenéticos sejam capazes de regular a transcrição de ambos os genes, a falta de correlação entre os níveis de mRNA e proteína para H2A.Z sugerem o envolvimento de um mecanismo pós-translacional. De facto, a sirtuina 1 tem a capacidade de degradar H2A.Z, tal como previamente descrito para cardiomiócitos. Desta forma, os níveis de proteína H2A.Z são indirectamente regulados por fármacos epigenéticos, provavelmente através da sobreregulação do gene SIRT1. Em tumores primários da próstata, a sobreexpressão de H2AFZ e subexpressão de I validam os dois genes como alvos de tratamento epigenético.