Caracterização da função do sistema scwdABC de Staphylococcus aureus em interações inter-espécie e com o hospedeiro

• Autor(a) principal: Silva, Miguel Ângelo Patinho
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/150891
• topic: Staphylococcus aureus; Biossíntese de Peptidoglicano; Bacteriocinas; Formação de Biofilme; Internalização em Macrófagos; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Outras Engenharias e Tecnologias

Em estudos anteriores sobre o gene murF de Staphylococcus aureus, responsável pela adição do terminal D-alanil-D-alanina do pentapéptido do peptidoglicano, verificou-se que a sua interrupção, no mutante de inserção F9, levava à anormal incorporação de tripéptido na parede, apesar da sua viabili- dade e taxa de crescimento não serem afetadas. A análise transcriptómica deste mutante revelou a exis- tência de um sistema sobreexpresso, constituído por dois genes de função desconhecida, scwdA e scwdB, e um gene que codifica uma proteína transmembranar, scwdC. Resultados preliminares mostra- ram que estas proteínas têm um papel no fitness de S. aureus aquando da presença de danos na parede e sugerem que ScwdA-B se associam a membranas biológicas através de hélices-α anfipáticas. A hipó- tese colocada é que a expressão das proteínas ScwdA-B seja desencadeada pelo dano na parede, sendo secretadas pela ScwdC, e atuem como bacteriocinas contra outras bactérias ou no hospedeiro. Esta tese teve como objetivo caracterizar o papel do sistema scwdABC em interações inter- espécie e com o hospedeiro. As proteínas ScwdA e ScwdB recombinantes foram expressas e purificadas como fusões His- tag, tendo estes processos sido otimizados. Quanto à localização, os resultados mostraram uma possível associação entre as proteínas ScwdA-B e a membrana celular de Escherichia coli, quando estas proteí- nas são sobreexpressas heterologamente por E. coli. A sobreexpressão de ScwdC na presença de tampão fosfato afetou negativamente o crescimento de S. aureus, um efeito que foi acentuado pelo aumento de concentração de fosfato, e foi revertido na presença de ScwdB, revelando um possível papel no fitness da bactéria em condições de stress. As proteínas, isoladamente, bem como o meio de cultura dos mu- tantes de sobreexpressão não apresentaram atividade antimicrobiana contra as espécies bacterianas e estirpes de S. aureus estudadas, não sendo possível concluir quanto à sua atividade como bacteriocinas. Adicionalmente, os resultados não mostraram uma correlação entre os genes scwdA-B e a capacidade de formação de biofilme. No entanto, a sua sobreexpressão resultou num aumento da internalização de S. aureus em macrófagos. revelando um possível papel de ScwdA-B na interação com o hospedeiro.