Caracterização de plasmídeos de Staphylococcus epidermidis e correlação com a resistência a compostos antimicrobianos mediada por efluxo

• Autor(a) principal: HOLTREMAN, Frederico Duarte
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/53495
• topic: Ciências biomédicas; Biologia molecular; Plasmídeos de Staphylococcus epidermidis; Resistência; Efluxo; Bacterioterapia; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

Staphylococcus epidermidis coloniza a pele e mucosas do Homem e de animais, sendo considerado um importante agente patogénico oportunista em clínica humana e veterinária. Embora já estejam descritos diversos determinantes plasmídicos de resistência a compostos antimicrobianos nesta bactéria, a caracterização de plasmídeos de coleções alargadas de S. epidermidis e o seu papel na disseminação destas resistências é ainda relativamente escassa. O objectivo desta Dissertação foi identificar e caracterizar perfis plasmídicos de isolados comensais de S. epidermidis, correlacionando-os com a presença de genes de resistência a compostos antimicrobianos, com ênfase naqueles que codificam para bombas de efluxo. Para isso, estudou-se uma coleção de 112 S. epidermidis de colonização nasal em profissionais e estudantes de Medicina Veterinária. O DNA plasmídico foi isolado pelo método de lise alcalina e o perfil plasmídico determinado por digestão com a enzima de restrição EcoRI (RFLP). A detecção de genes plasmídicos que codificam para bombas de efluxo associadas a resistência a antibióticos (msrA, tetK, vga(A) e vga(C)), a biocidas (qacG, qacJ) e a metais pesados (cadA, cadD e arsB) foi realizada por PCR e a presença destes correlacionada com o perfil de resistência estabelecido em trabalhos anteriores. Este estudo permitiu demonstrar a presença de plasmídeos nos 112 isolados analisados, sendo a presença de plasmídeos de grandes dimensões (> 23 kb) predominante. A maioria dos isolados (66%) tinha dois ou mais plasmídeos. A análise por RFLP evidenciou uma grande heterogeneidade dos perfis plasmídicos. A pesquisa por PCR permitiu detectar o gene msrA em 35 de 57 isolados resistentes a macrólidos (61,4 %), o gene tet(K) em 25 dos 26 isolados resistentes à tetraciclina (96,2%), o gene vga(A) em 12 dos 19 isolados com resistência constitutiva à clindamicina (63,2%) e em 3 dos 19 com resistência indutível à clindamicina (15,8%) e o gene vga(C) em 15 dos 19 isolados com resistência constitutiva à clindamicina (78,9%) e em 15 dos 19 isolados com resistência indutível a este antibiótico (78,9%), naquela que deverá ser das primeira descrições deste gene em isolados de origem humana. Para os metais pesados, nomeadamente para o cádmio, apenas se detectou o gene cadA em 3 dos 112 isolados (2,7%), não se tendo identificado a presença do gene cadD. Por fim, nenhum isolado apresentou os genes qacJ e qacG, associados à susceptibilidade reduzida a biocidas e corantes. Este trabalho demonstra a elevada frequência de plasmídeos e de determinantes que conferem resistência por efluxo a antibióticos em estirpes de S. epidermidis de colonização nasal em humanos em contacto próximo com animais. O alargamento desta análise a outros genes de resistência, permitirá explorar a importância destes e dos plasmídeos que os transportam na disseminação de estirpes resistentes, com especial destaque para a ligação entre as vertentes humana e veterinária.