Terapia Génica Mitocondrial

• Autor(a) principal: Costa, Carolina Vicente Santos
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.6/5942
• topic: Citopatias Mitocondriais; Compostos Fluorescentes; Dnamt; Mitocôndria; Nanopartículas; Pdna; Terapia Génica Mitocondrial; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia:: Outras Engenharias e Tecnologias

Para além dos 23 pares de cromossomas que uma célula contem, o genoma humano também é constituído pelo genoma mitocondrial. A principal função da mitocôndria é a produção de níveis altos de energia (ATP) usada pelas células por via da respiração aeróbia. Como consequência desta função, a produção de espécies reativas de oxigénio pode danificar o mtDNA, organelos celulares e a própria célula. Comparativamente com o nDNA, a taxa de mutações no mtDNA é superior devido à falta de mecanismos de proteção e de reparação. Como resultado, ocorrem danos em células e tecidos que despendem níveis mais elevados de energia como é o caso do cérebro, coração e fígado. Atualmente estão associadas doenças que resultam das mutações ocorridas no genoma mitocondrial, como é o caso de MELAS, MERRF e SL. Desta forma, é necessário a introdução de novos genes mitocondriais com vista a restabelecer as funções perdidas pelo organelo, como é o caso da terapia de genes mitocondrial. Esta dissertação de mestrado tem como base o desenvolvimento de um transportador incorporando o gene mitocondrial ND1 que consiga entregar eficazmente o DNA plasmídico (pDNA) à mitocôndria e que possa, futuramente, ser usado como uma alternativa para a terapia génica mitocondrial. A introdução de compostos fluorescentes às nanopartículas torna-se a principal novidade deste projeto. Este projeto foi dividido em 2 etapas: 1. Síntese e caracterização de compostos fluorescentes; 2. Síntese e caracterização das nanopartículas à base de carbonato de cálcio pelo método de co precipitação. As nanopartículas à base de carbonato de cálcio, incorporadas com os compostos fluorescentes e o plasmídeo, oferecem qualidades únicas como biocompatibilidade, baixo custo e facilidade de produção. Parâmetros como a morfologia, tamanho, potencial zeta, capacidade de encapsulamento, degradabilidade e biocompatibilidade foram testados neste trabalho. Os resultados demonstraram que as nanopartículas têm capacidade e características ideais para futuros ensaios in vitro e expressão da proteína correspondente ao gene ND1. Em suma, através do conhecimento já adquirido de outros protocolos de terapia génica mitocondrial e a realização deste vetor não viral com afinidade pela mitocôndria traz avanços importantes no tratamento a diversas patologias associadas à mitocôndria.