Clonagem e expressão génica de potenciais candidatos antigénicos do parasita Trypanosoma brucei brucei

• Autor(a) principal: TEIXEIRA, Ana Filipa Gonçalves
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/19199
• topic: Parasitologia médica; Doença do sono; Clonagem genética; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

A doença do sono ou tripanossomose humana africana é uma patologia parasitária exclusivamente africana, cujo agente etiológico do género Trypanosoma é transmitido pela picada da mosca tsé-tsé, pertencente ao género Glossina. Afeta milhões de pessoas e animais anualmente, representando um grande fator de atraso no desenvolvimento do continente africano. Caracteristicamente negligenciada, poucos fundos são disponibilizadas para o controlo e investigação da Tripanosomose Africana. Não existe vacina para a doença e os fármacos disponíveis para o tratamento são pouco eficientes e apresentam elevada toxicidade. Amplificou-se a partir de cDNA extraído de formas sanguíneas de T. b. brucei a sequência génica da enzima TSA, sugerindo a expressão da enzima TSA em formas sanguíneas de T. b. brucei. Duas proteínas recombinantes de T. brucei – Glicoproteína Invariável de Superfície (ISG) e a região N-terminal da Trans-sialidase (nTSA) foram subclonadas no vetor comercial pET28a. Através da subclonagem dos genes de interesse ISG e TSA neste plasmídeo de expressão procariota - pET28a - foi possível produzir as proteínas recombinantes ISG e nTSA em Escherichia coli. Expressaram-se as proteínas recombinantes em várias linhagens celulares de E. coli e imunoidentificaram-se ambas através de immunoblot com soro de animais positivos para T. b. brucei. Imunidentificou-se a proteína recombinante nTSA através de immunoblot frente a soro de animais imunizados com o plasmídeo capacitado de expressão em sistema eucariota nTSApVAX1. Avaliou-se o potencial imunogénico dos plasmídeos ISGpVAX1, nTSApVAX1 e PLCpVAX1 através de imunização génica do modelo experimental da THA. Processou-se soro de animais imunizados com estes plasmídeos através de ELISA para deteção de anticorpos anti-T. b. brucei. Os três protótipos vacinais utilizados neste estudo foram capazes de induzir anticorpos da classe IgG reativos ao extrato proteico de T. brucei brucei, sugerindo então a expressão em formas sanguíneas do parasita dos antigénios ISG, TSA e PLC. Contrariamente ao que tem sido sugerido pela literatura até então, foi possível amplificar de cDNA de formas sanguíneas de T. b. brucei o gene TSA, sugerindo pela primeira vez a expressão deste gene nas formas sanguíneas de T. b. brucei.