Antibodies purification using centrifugal partition chromatography

• Autor(a) principal: Ferreira, Filipe Miguel Garcia
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/22486
• topic: Bioquímica; Biofármacos; Anticorpos monoclonais - Purificação; Sistemas aquosos bifásicos; Cromatografia líquida

A dificuldade em desenvolver antibióticos mais eficientes, numa altura em que a resistência microbiana tem vindo a aumentar, torna essencial o desenvolvimento de terapias alternativas, económicas e eficazes. Os anticorpos obtidos a partir da gema de ovo de galinha, imunoglobulina Y (IgY), têm-se destacado não só pela sua produção mais simples e em maior quantidade em relação aos anticorpos policlonais de mamífero, mas também devido às inúmeras vantagens em termos de aplicações. No entanto, atualmente não existe uma plataforma de purificação de IgY que seja económica, eficaz e passível de aplicação a nível industrial - uma lacuna que este trabalho se propõe a resolver. Assim, neste trabalho, estudou-se a possibilidade da utilização de sistemas aquosos bifásicos (SAB) compostos por PEG 1000 e tampão fosfato (K2HPO4/KH2PO4) ou K2HPO4, seguidos de um passo de ultrafiltração, ou acoplados à tecnologia de cromatografia de partição de força centrífuga (CPC), para a purificação de IgY. Foram avaliados os efeitos de pH (5,5; 6,0; 6,5; 7,5; e 8,0) e composição de PEG e sal na extração de IgY, bem como as condições utilizadas na CPC (fluxo da fase móvel, rotação e modo de operação). Foi estudada a estabilidade do anticorpo em soluções aquosas dos componentes utilizados nos SAB utilizando dicroísmo circular, assim como a atividade/estabilidade do anticorpo após o processo de purificação por ELISA, salientando assim o efeito do PEG 1000 na estrutura secundária e na atividade do IgY. O ATPS constituído por 18 % PEG 1000 + 13 % tampão fosfato a pH 6,0 conduz aos melhores resultados em termos de purificação, obtendo-se num único passo de extração uma pureza de IgY de 39 %. Após a aplicação de CPR, obteve-se IgY com um grau de pureza de 51 %, e com ultrafiltração, IgY com um grau de pureza de 47 %. Face aos resultados obtidos, destaca-se a CPR como a técnica mais adequada dado que permite obter IgY com um maior grau de pureza e ser passível de aplicação à escala industrial.