Extração e purificação de imunoglobulina G utilizando sistemas aquosos bifásicos constituídos por líquidos iónicos como adjuvantes

• Autor(a) principal: Amorim, Ana Paula Dias
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/22511
• topic: Bioquímica clínca; Imunoglobinas; Anticorpos monoclonais; Biofármacos

Os anticorpos monoclonais (mAbs) apresentam-se como uma das classes prevalentes de proteínas recombinantes terapêuticas para o tratamento de diversas doenças, incluindo o cancro (ex: cancro da mama, leucemia e cancro da próstata), e doenças autoimunes (artrite reumatoide e doença de Crohn), cardiovasculares e infeciosas. Atualmente, a produção de IgG apresenta uma limitação maioritária que compreende a sua etapa de captura através de cromatografia de afinidade com proteína A (proA), seguida de duas etapas cromatográficas de purificação. Apesar da sua vasta utilização na indústria farmacêutica, a utilização de cromatografia nas várias etapas traduz-se num elevado custo do produto final. Os sistemas aquosos bifásicos (SAB) apresentam-se como uma alternativa não-cromatográfica para a purificação de mAbs, permitindo uma redução de custos e do número de etapas envolvidas no processo de purificação. No entanto, os SAB tradicionais constituídos maioritariamente por sais e/ou polímeros têm-se mostrado pouco seletivos, resultando em baixos rendimentos e fatores de purificação. A utilização de líquidos iónicos (LIs) neste tipo de sistemas pode ser vantajosa em termos de seletividade uma vez que é possível manipular a polaridade e afinidade das fases coexistentes do SAB através da escolha adequada da sua estrutura química. Neste sentido, o objetivo deste trabalho consiste no estudo de diferentes LIs como adjuvantes em SAB convencionais do tipo polímero-polímero, nomeadamente PEG/dextrano, para a purificação de IgG diretamente de sobrenadantes de linhas celulares desenvolvidas a partir de células de ovário de hamster chinês (CHO). Para tal, determinaram-se primeiramente os diagramas de fases dos sistemas quaternários constituídos por PEG + Dextrano + H2O + LIs, e posteriormente avaliou-se o seu potencial para extrair seletivamente ou purificar mAbs a partir dos sobrenadantes estudados. Através dos dados obtidos, é possível constatar que a presença de LIs como adjuvantes permite manipular a polaridade e afinidade das fases do SAB, permitindo aumentar o seu potencial de extração de IgG. Mais ainda, os sistemas constituídos por 15% de [C4mim]Br e 5% de [C4mim][HSO4] demonstraram-se promissores para a extração de IgG, potenciando a extração do anticorpo para a fase rica em PEG com um rendimento superior a 90%, embora com um baixo grau de pureza. Face aos resultados obtidos, é ainda necessário otimizar os SAB estudados, o que pode ser alcançado variando a composição do sistema e natureza do LI adicionado, de modo a desenvolver uma plataforma de captura de mAbs diretamente a partir de sobrenadantes de culturas celulares CHO capaz de competir com a cromatografia proA atualmente utilizada.