Expressão da região P2 da proteína VP1 de sapovírus para produção de anticorpos para uso diagnóstico

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silva, Rayane Luzia Viegas da
Data de Publicação: 2012
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UCB
Texto Completo: https://repositorio.ucb.br:9443/jspui/handle/10869/1496
Resumo: Biomedicina
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Este trabalho tem por finalidade produzir anticorpos policlonais contra sapovírus, para o desenvolvimento de estratégias de detecção, tornando-se uma ferramenta útil na rotina laboratorial, além de permitir uma melhor compreensão epidemiológica, visto que, no Brasil há escassez de relatos da circulação do sapovírus. A partir de um sapovírus isolado no Distrito Federal foi realizada clonagem molecular utilizando a região do gene P2 de capsídeo no vetor pENTR 2B em células de E. coli cepa DH5-α, seguida de subclonagem no vetor pDEST 17 em E. coli cepa DH5-α, expressão da proteína em E. coli cepa BL21 AI, purificação da proteína utilizando uma coluna de Ni-NTA que possui a afinidade a proteína contendo His-Tag e inoculação em ratos. A proteína expressa possuía tamanho de 22kDa e foi confirmada através de Western Blotting utilizando anticorpo contra a região His-Tag. A obtenção e inoculação dessa proteína foi um grande avanço para a produção de anticorpos. Esses anticorpos serão úteis para o desenvolvimento de um kit diagnóstico baseado em ELISA.Diarrhoeal diseases are among the leading causes of morbidity and mortality worldwide. The sapovirus have been described as a common cause of epidemic gastrointestinal diseases however, there is a lack of information on the prevalence of these viruses in developing countries, since there is no method which permits the routine detection in laboratory. This work aims to produce polyclonal antibodies against sapovirus, to develop strategies for detection, making it an useful tool in laboratory, and allows a better epidemiological understanding, because in Brazil there are no reports of sapovirus circulation. From a sapovirus isolated in the Federal District, molecular cloning was performed using the P2 region of capsid gene in the vector pENTR2B of E. coli DH5-α strain, followed by subcloning into the vector pDEST17 in E.coli DH5-α strain, express the protein in E.coli BL21AI strain. The protein purification was performed using a Ni-NTA column that has affinity by the protein containing His-Tag. This protein was inoculated in mice for antibody production. The expressed protein had the expected size of 22kD and its identity was confirmed by Western Blotting using antibodies against His-tag region. The acquisition and inoculation of this protein was a major breakthrough for the production of antibodies. These antibodies will be useful for developing a diagnostic kit based on ELISA.Submitted by Marcelo Azevedo Coutinho (mcoutinho@ucb.br) on 2013-08-28T20:06:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20618 bytes, checksum: b67ac4fa37d756ac08366dbc4e32ada7 (MD5) Rayane Luzia Viegas da Silva.pdf: 803645 bytes, checksum: 31e68621b698444ba51a005e228c6e41 (MD5)Approved for entry into archive by Kelson Anthony de Menezes(kelson@ucb.br) on 2013-08-28T20:40:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20618 bytes, checksum: b67ac4fa37d756ac08366dbc4e32ada7 (MD5) Rayane Luzia Viegas da Silva.pdf: 803645 bytes, checksum: 31e68621b698444ba51a005e228c6e41 (MD5)Made available in DSpace on 2013-08-28T20:40:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20618 bytes, checksum: b67ac4fa37d756ac08366dbc4e32ada7 (MD5) Rayane Luzia Viegas da Silva.pdf: 803645 bytes, checksum: 31e68621b698444ba51a005e228c6e41 (MD5) Previous issue date: 2012-11-12Made available in DSpace on 2016-10-10T03:41:55Z (GMT). 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