Efeitos da guanosina sobre o sistema glutamatérgico e estado redox em altas concentrações de glutamato
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2019 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações do UCpel |
Texto Completo: | http://tede.ucpel.edu.br:8080/jspui/handle/jspui/992 |
Resumo: | A excitotoxicidade glutamatérgica está envolvida em vários processos patológicos no cérebro. Neste contexto, os astrócitos desempenham um papel importante no metabolismo do sistema glutamatérgico e na captura do glutamato (Glu). O objetivo deste estudo é investigar a ação da guanosina (GUO) exerce em fatias de hipocampo de camundongos incubados com diferentes concentrações de Glu. Os camundongos foram eutanasiados por decapitação e o hipocampo foi removido, pesado e fatiado. Estas fatias foram pré-incubadas a 4°C e depois lavadas em um meio contendo líquido cefalorraquidiano artificial (aCSF) contendo glucose (5 mM). Após este processo, as fatias foram incubadas com diferentes concentrações de Glu e GUO em diferentes tempos em banho metabólico com agitação constante a 37ºC e aerado com uma mistura gasosa (95%CO2 : 5%O2), onde foi observado o melhor efeito neuroprotetor da GUO. Primeiro, analisamos a concentração de Glu que produz um aumento na utilização de Glu para o CO2 (L - [ 14C (U)] - Glu ) sem lesão celular. Obtivemos uma curva com diferentes concentrações de Glu (0,30,100 e 1000µM) e tempos diferentes (0 a 90 minutos), observamos que a concentração de 1000 µM de Glu aumenta a oxidação de Glu no período entre 30-60 minutos de incubação sem lesão celular (medida por MTT e citometria de fluxo) . Nessa condição (concentração e tempo de Glu), obtivemos uma curva de GUO (0 a 300µM) e mostramos que 100µM de GUO aumentam (35%) a oxidação de Glu. Por trás deste resultado, estudamos o efeito de 100µM de GUO na captação de Glu (L- [ 3,4-3H] -glutamato) em fatias de hipocampo de camundongos incubadas com 1000µM de Glu por 1h (30-60min) e nesta situação o GUO aumenta a absorção de Glu (cerca de 45%). Além disso, demonstramos que 100µM de GUO impedem o aumento da atividade de ROS e SOD após 30 e 60 minutos de incubação de 1000µM de Glu. Esta é a primeira vez que um estudo mostrou a quantidade de GUO que promove um aumento na captação e utilização de Glu em conjunto. No entanto, mais estudos são necessários para determinar se estas quantidades de GUO atuam de modo intracelular ou diretamente nas membranas. |
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Efeitos da guanosina sobre o sistema glutamatérgico e estado redox em altas concentrações de glutamatoglutamato; excitotoxicidade; guanosina; metabolismo da energia celebral; hipocampo; estresse oxidativoglutamate; excitotoxicity; guanosine; brain energy metabolism; hippocampus slices; oxidative stressCIENCIAS DA SAUDEA excitotoxicidade glutamatérgica está envolvida em vários processos patológicos no cérebro. Neste contexto, os astrócitos desempenham um papel importante no metabolismo do sistema glutamatérgico e na captura do glutamato (Glu). O objetivo deste estudo é investigar a ação da guanosina (GUO) exerce em fatias de hipocampo de camundongos incubados com diferentes concentrações de Glu. Os camundongos foram eutanasiados por decapitação e o hipocampo foi removido, pesado e fatiado. Estas fatias foram pré-incubadas a 4°C e depois lavadas em um meio contendo líquido cefalorraquidiano artificial (aCSF) contendo glucose (5 mM). Após este processo, as fatias foram incubadas com diferentes concentrações de Glu e GUO em diferentes tempos em banho metabólico com agitação constante a 37ºC e aerado com uma mistura gasosa (95%CO2 : 5%O2), onde foi observado o melhor efeito neuroprotetor da GUO. Primeiro, analisamos a concentração de Glu que produz um aumento na utilização de Glu para o CO2 (L - [ 14C (U)] - Glu ) sem lesão celular. Obtivemos uma curva com diferentes concentrações de Glu (0,30,100 e 1000µM) e tempos diferentes (0 a 90 minutos), observamos que a concentração de 1000 µM de Glu aumenta a oxidação de Glu no período entre 30-60 minutos de incubação sem lesão celular (medida por MTT e citometria de fluxo) . Nessa condição (concentração e tempo de Glu), obtivemos uma curva de GUO (0 a 300µM) e mostramos que 100µM de GUO aumentam (35%) a oxidação de Glu. Por trás deste resultado, estudamos o efeito de 100µM de GUO na captação de Glu (L- [ 3,4-3H] -glutamato) em fatias de hipocampo de camundongos incubadas com 1000µM de Glu por 1h (30-60min) e nesta situação o GUO aumenta a absorção de Glu (cerca de 45%). Além disso, demonstramos que 100µM de GUO impedem o aumento da atividade de ROS e SOD após 30 e 60 minutos de incubação de 1000µM de Glu. Esta é a primeira vez que um estudo mostrou a quantidade de GUO que promove um aumento na captação e utilização de Glu em conjunto. No entanto, mais estudos são necessários para determinar se estas quantidades de GUO atuam de modo intracelular ou diretamente nas membranas.Glutamatergic excitotoxicity is involved in several pathological processes in the brain. In this context, astrocytes play an essential role in glutamatergic system metabolism and glutamate capture (Glu). The objective of this study is to investigate the mechanism in guanosine (GUO), the neuroprotection during the hippocampus of mice incubated with different containers of Glu. The mice were euthanized by decapitation and the hippocampus was removed, weighed and sliced. The slices are preincubated at 4°C and then washed in liquid medium with artificial cerebrospinal fluid (aCSF) containing glucose (5 mM). In this process, the series are incubated with different concentrations of Glu and GUO at different times in a bath at a constant temperature of 37 ° C and aerated with a gas mixture (95%CO2: 5%CO2), the best neuroprotective effect of GUO will be observed. First, we analyzed the concentration of Glu that produce an increase in Glu utilization to CO2 (L-[14C(U)]-Glu) without cell injury; we proceed a curve with different concentrations of Glu (0,30,100 and 1000µM) and different times (0 at 90 minutes) and we observed that the concentration of 1000µM of Glu increase Glu oxidation in the time between 30-60 minutes of incubation without cell injury (measured by MTT and flow cytometry). In this condition (Glu concentration and time), we make a curve of GUO (0 at 300µM) and showed that 100µM of GUO increase (35%) Glu oxidation. Behind this result, we study the effect of 100µM of GUO on Glu uptake (L-[3,4-3H]-glutamate) in mice hippocampal slices incubated with 1000µM of Glu per 1h (30-60minutes) and in this situation GUO increase Glu uptake (around 45%). Also, we demonstrated that 100µM of GUO prevent the increase of ROS and SOD activity after 30 and 60 minutes of 1000µM of Glu incubation. This is the first time that a study showed which GUO promotes an increase in Glu uptake and utilization together. However, more studies are necessary to determine if GUO act intracellularly or directly in membranes.Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPqUniversidade Catolica de PelotasCentro de Ciencias da SaudeBrasilUCPelPrograma de Pos-Graduacao em Saude ComportamentoAssis, Adriano Martimbianco deNedel, FernandaYamin, Adenauer CorrêaSantos, Aline LongoniPieper, Leandro Zafalon2023-06-12T14:30:11Z2019-12-19info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfPieper, Leandro Zafalon. Efeitos da guanosina sobre o sistema glutamatérgico e estado redox em altas concentrações de glutamato. 2019. 76 f. Tese( Programa de Pos-Graduacao em Saude Comportamento) - Universidade Catolica de Pelotas, Pelotas .http://tede.ucpel.edu.br:8080/jspui/handle/jspui/992porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações do UCpelinstname:Universidade Católica de Pelotas (UCPEL)instacron:UCPEL2023-06-13T04:10:08Zoai:tede.ucpel.edu.br:jspui/992Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www2.ufpel.edu.br/tede/http://tede.ucpel.edu.br:8080/oai/requestbiblioteca@ucpel.edu.br||cristiane.chim@ucpel.tche.bropendoar:2023-06-13T04:10:08Biblioteca Digital de Teses e Dissertações do UCpel - Universidade Católica de Pelotas (UCPEL)false |
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A excitotoxicidade glutamatérgica está envolvida em vários processos patológicos no cérebro. Neste contexto, os astrócitos desempenham um papel importante no metabolismo do sistema glutamatérgico e na captura do glutamato (Glu). O objetivo deste estudo é investigar a ação da guanosina (GUO) exerce em fatias de hipocampo de camundongos incubados com diferentes concentrações de Glu. Os camundongos foram eutanasiados por decapitação e o hipocampo foi removido, pesado e fatiado. Estas fatias foram pré-incubadas a 4°C e depois lavadas em um meio contendo líquido cefalorraquidiano artificial (aCSF) contendo glucose (5 mM). Após este processo, as fatias foram incubadas com diferentes concentrações de Glu e GUO em diferentes tempos em banho metabólico com agitação constante a 37ºC e aerado com uma mistura gasosa (95%CO2 : 5%O2), onde foi observado o melhor efeito neuroprotetor da GUO. Primeiro, analisamos a concentração de Glu que produz um aumento na utilização de Glu para o CO2 (L - [ 14C (U)] - Glu ) sem lesão celular. Obtivemos uma curva com diferentes concentrações de Glu (0,30,100 e 1000µM) e tempos diferentes (0 a 90 minutos), observamos que a concentração de 1000 µM de Glu aumenta a oxidação de Glu no período entre 30-60 minutos de incubação sem lesão celular (medida por MTT e citometria de fluxo) . Nessa condição (concentração e tempo de Glu), obtivemos uma curva de GUO (0 a 300µM) e mostramos que 100µM de GUO aumentam (35%) a oxidação de Glu. Por trás deste resultado, estudamos o efeito de 100µM de GUO na captação de Glu (L- [ 3,4-3H] -glutamato) em fatias de hipocampo de camundongos incubadas com 1000µM de Glu por 1h (30-60min) e nesta situação o GUO aumenta a absorção de Glu (cerca de 45%). Além disso, demonstramos que 100µM de GUO impedem o aumento da atividade de ROS e SOD após 30 e 60 minutos de incubação de 1000µM de Glu. Esta é a primeira vez que um estudo mostrou a quantidade de GUO que promove um aumento na captação e utilização de Glu em conjunto. No entanto, mais estudos são necessários para determinar se estas quantidades de GUO atuam de modo intracelular ou diretamente nas membranas. |
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