i-ELISA como ferramenta avaliadora na otimização de imunoensaio e exposição experimental de ocratoxina a (OTA) em parâmetros hematológicos de pintainhos : : via oral versus inoculação subcutânea

• Autor(a) principal: Shimizu, Cleverson Ferreira
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
• Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/12298
• topic: Ocratoxinas; Micotoxinas; Frango de corte; Teste imunoenzimático; Ochratoxins; Mycotoxins; Broilers (Chickens); Enzyme-linked immunosorbent assay

Resumo: O trabalho indica cuidados necessários para operação analítica – imunoensaio – empregando ELISA indireta (i-ELISA) como ferramenta avaliadora em testes de imunorreagentes e, procedimentos para análise de ocratoxina A (OTA) Embora OTA seja o principal análogo nefrotóxico e hepatotóxico do grupo, apresenta toxicidade e carcinogenicidade inferior a aflatoxina B1 O experimento consistiu de: (i) tendo como anticorpo primário o anticorpo monoclonal anti-OTA (AcManti-OTA) produzido por hibridoma linhagem OTA1, secretora de AcM - isotipo IgG1 kappa contra OTA, proceder i-ELISA com AcManti-OTA armazenado a -2°C Iniciando com a concentração de ,89 mg/mL e diluição de 1/1 do anticorpo primário, sendo que as avaliações consistiram desde testes perante direção de pipetagem, higienização da lavadora de microplaca, estabilidade de conjugado OTA-BSA e, comparação entre lotes de conjugado perante sensibilização de microplaca A melhor condição para i-ELISA consistiu de: conjugado OTA-BSA a 1 ng/mL em tampão bicarbonato ,1 mol L-1pH 9,6; diluição de anticorpo primário para 1/5; anticorpo secundário a 1/4; bloqueio com BSA a ,1% A avaliação de AcM perante produção, quantidade e viabilidade através de i-ELISA é fundamental para prosseguir com ensaios subsequentes A maximização do uso de AcM produzido no laboratório permite redução de custo (atingiu redução no fator de 5) e rejeitos, garantindo o fornecimento de reagente dependente de Kit importado de alto valor comercial (ii): o estudo comparativo de efeito no parâmetro hematológico de OTA em pintainho de linhagem Cobb consistiu de dois grupos submetidos a exposição oral e subcutânea O grupo de exposição oral consistiu de 42 aves, de 1 dia de idade, expostos a ração contaminada com OTA nas doses de , ,1; ,3; ,5; ,7; ,9 e 1,1 mg de OTA/kg de ração O grupo de exposição subcutânea consistiu de 36 aves, de 5 dias de idade expostos porinoculação subcutânea de OTA nas concentrações de , ,1; ,5; ,9; 1,3 e 1,7 mg de OTA/kg de peso corporal O grupo da via subcutânea apresentou maior alteração em células hematológicas, desde a dose de ,1 mg de OTA/kg, sugerindo efeito de OTA e respectivos metabólitos ao nível de medula óssea e órgãos linfóides Ie, a contaminação via subcutânea possivelmente não expôs OTA a biotransformaçãohepato-digestiva responsável pela detoxicação capaz de transformar em análogo com menor toxicidade; este fator poderia justificar a maior toxicidade hematológica por via subcutânea, em relação a contaminação via oral