Análise dos fatores de virulência e proteoma de Candida tropicalis sensível e resistente ao fluconazol

• Autor(a) principal: Kanoshiki, Renata Lumi
• Data de Publicação: 2024
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
• Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/11222
• topic: Candida; Fungos patogênicos; Drogas; Resistência; Virulência (Microbiologia); Virulence (Microbiology); Resistance to drugs; Anti-infective agents

Resumo: Espécies de Candida são agentes oportunistas mais frequentes em infecções fúngicas Embora Candida albicans seja a principal e a mais estudada espécie do gênero Candida, espécies não-albicans vêm emergindo como importantes agentes de candidíases Entre as espécies não-albicans relata-se C tropicalis como importante agente etiológico de candidemia em pacientes com câncer, principalmente aqueles com leucemia Em países da América Latina, esta espécie é bastante frequente, mesmo entre pacientes não portadores de câncer, sendo a segunda principal causa de candidemia no Brasil A alta mortalidade de pacientes infectados por C tropicalis e o surgimento de isolados resistentes a antifúngicos corroboram sua importância clínica Na literatura relata-se que a exposição de Candida spp a antifúngicos influencia na expressão de fatores de virulência, dos quais se destacam: aderência a tecidos do hospedeiro, morfogênese, formação de biofilme e secreção de enzimas Haja vista sua importância à patogênese, este trabalho teve como objetivo estudar a influência do fluconazol sobre os fatores de virulência e o proteoma de isolados de C tropicalis Para tanto, fatores de virulência de C tropicalis em amostras isoladas de cavidade bucal, ponta de cateter e hemocultura foram analisados Nesta última, os fatores de virulência foram avaliados também após breve exposição ao fluconazol (1 h) e após desenvolvimento de resistência in vitro Ademais, foi realizada análise comparativa do proteoma dos isolados de C tropicalis resistentes e sensíveis ao fluconazol, e comparação de células planctônicas e sésseis Para a identificação das espécies foram utilizados testes fenotípicos padrões e semi-nested PCR A concentração inibitória mínima (CIM) para o fluconazol foi determinada por microdiluição em caldo A atividade de protease foi avaliada em placa utilizando-se meio mínimo contendo caseína de leite ,6%, enquanto a atividade de fosfolipase e hemolisina foram investigadas em Sabouraud Dextrose Agar com gema de ovo a 4% e sangue de carneiro a 5%, respectivamente O ensaio de hidrofobicidade da superfície celular (CSH) foi realizado pela técnica de Anil et al (21) Para a formação de biofilme foram utilizados dois diferentes métodos: avaliação da porcentagem de transmitância bloqueada (%Tbloc) e o ensaio de redução do XTT A adesão em poliestireno e células de mamíferos também foi analisada Todas as amostras não apresentaram atividade de fosfolipase e foram capazes de hemolisar parcialmente sangue de carneiro (similar a hemólise do tipo alfa de Streptococcus spp) Diferenças relacionadas à origem das amostras (p< ,5) foram encontradas quanto à produção de biofilme, e hidrofobicidade celular Nesses ensaios, amostras de cateter e de cavidade bucal apresentaram maior capacidade de produção de biofilme e maior hidrofobicidade celular em relação à amostra de hemocultura A resistência in vitro só foi obtida para o isolado de sangue, e diferenças significativas (p< ,5) foram detectadas na atividade proteolítica, formação de biofilme e CSH Em todos os casos, a cepa resistente ao fluconazol apresentou maior atividade para os fatores analisados e a breve exposição ao fluconazol resultou em diminuição da expressão das mesmas Foi observado também correlação entre formação de biofilme e hidrofobicidade da superfície celular Na análise proteômica, as proteínas totais foram extraídas por método mecânico e os géis bidimensionais foram corados com Coomassie G-25 coloidal Após análise comparativa dos géis, 7 e 2 polipeptídeos mostraram-se diferencialmente expressos por células planctônicas das cepas sensível e resistente, respectivamente Por outro lado, quando os proteomas de células sésseis foram comparados, 1 e 11 polipeptídeos apresentaram expressão diferencial na cepas sensível e resistente, respectivamente Finalmente, 5 e 7 polipeptídeos foram diferenciamente expressos em células planctônicas e sésseis da cepa sensível ao fluconazol