Obtenção de gp43 de Paracoccidioides brasiliensis recombinante em Escherichia coli e produção de anticorpos policlonais para gp43 em galinhas poedeiras imunizadas com vacina de DNA

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Petroni, Tatiane Ferreira
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UEL
Texto Completo: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/12112
Resumo: Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, endêmica na América Latina, causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis (Pb) É considerada a oitava causa de mortes por doenças infecciosas e parasitárias no Brasil Os testes imunológicos são utilizados tanto para fins de diagnóstico, acompanhamento do tratamento e epidemiologia da PCM A glicoproteína de 43 kDa (gp43) que é o principal antígeno utilizado nos ensaios imunológicos, possui epítopos carboidrato que podem levar a reações cruzadas com soros de pacientes com histoplasmose e Doença de Jorge Lobo A produção de uma gp43 recombinante em E coli poderia minimizar as reações cruzadas, uma vez que esta não é glicosilada No presente trabalho, o gene da gp43 foi clonado no vetor de expressão pET3a+ (Novagen) e transformado em E coli BL21 (DE3) Star O peptídeo de aproximadamente 42 kDa presente no extrato protéico da cultura de bactérias induzidas com IPTG foi reconhecido em Western blot por soro de cão positivo para gp43 Entretanto, a proteína não pôde ser purificada em coluna de afinidade ao níquel Diante disto, foi proposta a produção de uma vacina de DNA contendo o gene da gp43 para imunizar galinhas poedeiras e obter anticorpos policlonais anti-gp43 para utilização em ELISA Assim, o gene da gp43 foi clonado no vetor de expressão em células de mamíferos (pcDNA31), seqüenciado e utilizado na imunização de 3 galinhas poedeiras A produção de anticorpos IgY anti-gp43 foi avaliado por ELISA utilizando gp43 nativa, e foi observado que apenas 1 galinha apresentou aumento nos níveis de anticorpos O presente trabalho mostrou que a vacina de DNA induziu a produção de anticorpos anti-gp43
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