Estudo in silico, in vitro e in vivo dos possíveis mecanismos de ação anti-inflamatória de derivados n-acilhidrazônicos substituidos

• Autor(a) principal: Silva, Simone Ângela Soares da
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEPB
• Texto Completo: http://tede.bc.uepb.edu.br/jspui/handle/tede/3201
• topic: Citocinas; Óxido nítrico; Ciclooxigenases; Cianoacetohidrazidicos; Processo inflamatório; Cyanoacetohydrazide; Cytokines; Nitric oxide; Cyclooxygenases; CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA

O processo inflamatório é uma reação do organismo a uma infecção ou lesão dos tecidos. As enzimas NOS e COX-2 são enzimas chaves na resposta inflamatória quando estimuladas principalmente por citocinas pró-inflamatórias. Compostos que atuem modulando a atividade dessas enzimas são promissores no combate a inflamação, a exemplo dos derivados N-acilhidrazônicos que mostram ser eficazes em modelos clássicos de inflamação in vivo e in vitro. Este trabalho teve como objetivo avaliar in silico, in vitro e in vivo, os possíveis mecanismos de ação anti-inflamatória das moléculas derivadas 2-cianoacetohidrazida da série JR (04, 09 e 19). Inicialmente foi realizado o estudo in silico dos três compostos e in vitro (de JR04, JR09 e JR19) frente às isoformas de cicloxigenase (COXs). Em seguida foi avaliada a toxicidade gástrica em camundongo e a citotoxicidade em eritrócitos humanos com os compostos JR09 e 19. Para investigar a participação da via óxido nítrico/guanilato ciclase do composto JR19 foi realizado o ensaio de peritonite induzida por carragenina em animais pré-tratandos com L-NAME (bloqueador inespecífico da oxido nítrico sintase) ou azul de metileno (bloqueador inespecífico da guanilato ciclase). Neste mesmo modelo foi realizada a dosagem de citocinas. Os resultados in silico mostraram que JR04, JR09 e JR9 interagem de forma específica com o sítio catalítico das COXs, e o composto JR04 teve melhor afinidade pela COX-1. O teste in vitro para as moléculas JR04 e JR09 e JR19 corroborou com o ensaio in silico, onde o JR04 mostrou-se mais seletivo para COX-1 com um índice de seletividade (IS) de 2,22 para COX-2, enquanto que as moléculas JR09 e 19 apresentaram um IS de 1,67 e IS de 1,51, respectivamente com uma porcentagem de inibição de 100% de COX-2 na concentração de 25mM. No ensaio de toxicidade gástrica os dois compostos (100 mg/kg via oral e subcutânea) não induziram lesões ulcerativas, mesmo sendo capazes de interagir com a COX-1. No ensaio de citotoxicidade em eritrócitos os compostos JR09 e JR19 apresentaram baixa atividade hemolítica, apresentando ainda um IC50 de 51,42 e 85,02 mg/mL, respectivamente. Na peritonite induzida por carragenina o composto JR19 foi capaz de reduzir significativamente a contagem de leucócitos do exsudato peritoneal em 48,3% em relação ao grupo controle, porem este efeito foi revertido nos animais pré-tratados com L-NAME ou azul de metileno, mostrando ser este efeito dependente da via NO/GCs. Os níveis das citocinas pró- inflamatórias TNF-α, IFN-γ, IL-6 e IL-17 também foram significativamente reduzidas com administração do composto JR19 e foi revertido nos animais pré-tratados com L-NAME, corroborando com a provável participação da via do NO no efeito anti-inflamatório deste composto. As concentrações das citocinas IL-2 e IL-4 não foram alteradas. Dessa forma, os compostos JR04, JR09 e JR19 provavelmente atuam por interação com as COXs, com os compostos JR09 e 19 atuando de forma seletiva sobre a COX-2, sem efeitos tóxicos gástricos. Além disso, o composto JR19 tem sua ação anti-inflamatória provavelmente ligada a manutenção dos níveis de NO e reduzindo citocinas pró-inflamatórias.