Avaliação do potencial anti-tumoral de um inibidor de gli1 em carcinoma escamocelular oral

• Autor(a) principal: Araújo, Taís Bacelar Sacramento de
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFBA
• Texto Completo: https://repositorio.ufba.br/handle/ri/36842
• topic: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::ODONTOLOGIA; Neoplasias bucais; Proteínas Hedgehog; Quimioterapia; Oral cancer; Hedgehog Proteins; Chemotherapy

Introdução. O carcinoma escamocelular oral (CEO) é uma doença que apresenta um pobre prognóstico e poucos avanços terapêuticos, sendo necessário desvendar os mecanismos envolvidos em sua patogênese, incluindo a participação de vias de sinalização embrionárias, como a via Hedgehog (HH). Esta cascata é importante para a iniciação e comportamento biológico tumoral, bem como para a manutenção da população de células-tronco tumorais, com reflexos diretos na resistência à fármacos. Objetivo. Estudar os efeitos antitumorais do composto X sobre a expressão gênica de componentes da via HH, proliferação e morte em células de CEO. Metodologia. As células de CEO (HSC3, CAL27, SCC4, SCC9, SCC15 e SCC25) foram cultivadas em meio DMEM. Inicialmente, a citotoxicidade foi avaliada contra diferentes células tumorais e não tumorais através do ensaio do alamar blue. A expressão de componentes da via HH foi avaliada através de reações de qPCR, utilizando TaqMan Gene Expression AssaysTM, após 12 horas de tratamento com os compostos-teste. Os ensaios de viabilidade, ciclo celular e padrão de morte em células HSC3 foram realizados em diferentes tempos de incubação do composto X (18 e 36 μM), através da citometria de fluxo. As alterações morfológicas foram avaliadas através dos parâmetros FSC (tamanho/volume) e SSC (granulosidade), obtidos por citometria. Resultados. A análise da citotoxicidade do compostoteste por Alamar Blue demonstrou uma maior sensibilidade ao tratamento para célula HSC3 (CI50: 36 µM) em relação aos outros tipos celulares testados, sendo escolhida para realização dos ensaios de análise dos efeitos do composto X em células de CEO. O composto X foi capaz de reduzir os níveis de mRNA do fator de transcrição GLI1 na concentração de 36 μM, após 12h de tratamento. O inibidor de GLI reduziu significativamente a viabilidade celular das células HSC3 a partir de 24h de tratamento. Os ensaios de análise do ciclo celular e padrão de morte demonstraram um aumento significativo da fragmentação nuclear na fase sub-G1 e morte celular por apoptose. Conclusão. O inibidor de GLI reduziu significativamente a expressão do gene GLI1, indicando redução da atividade downstream da via HH em 12 horas de tratamento. Além disso, o composto-teste reduziu significativamente a viabilidade e promoveu um aumento significativo da fragmentação nuclear e morte celular por apoptose em células de CEO.