Evaluation of the effects of Leishmania braziliensis exosomes in the production of Inflammatory mediators by macrophages
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Data de Publicação: | 2022 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Título da fonte: | Repositório Institucional da UFBA |
Texto Completo: | https://repositorio.ufba.br/handle/ri/38138 |
Resumo: | Exossomos são organelas de 30 a 100 nm secretadas por vários tipos de células. Elas ocorrem quando a membrana endossomal invagina em corpos multivesiculares (MVB) e são secretados através da fusão de MVBs com a membrana plasmática (PM). Os exossomos de Leishmania são compostos por vários fatores de virulência, como heat shock proteins, anexinas, GP63, proteínas de sinalização e também contêm mRNAs e miRNA. Nos últimos 10 anos, foi relatado que essas vesículas manipulam ativamente a sinalização do hospedeiro e as funções das células imunes, devido aos exossomos de Leishmania serem ricos em fatores de virulência como GP63. Estudos demonstram que os exossomos de Leishmania donovani ativam tirosina-fosfatases, regulando negativamente o IFN-γ e inibindo a expressão de moléculas microbicidas como TNF e NO, criando um microambiente que favorece a proliferação parasitária. Apesar de não possuir memória imunologica, estudos sugerem que após um primeiro estímuo os fagócitos momonucleares ´pdem ser “treinados”, passando por mudanças epigenéticas e respondendo de forma mais eficaza um segundo estímulo, dessa forma, a sensibilização de macrófagos com exossomos de L. braziliensis, antes de sua infecção por esse patógeno, pode estar associada à maior produção de citocinas inflamatórias, e ativação de inflamassoma, uma vez que as vias envolvidas neste processo já estariam ativadas. Métodos e Resultados: Macrófagos de indivíduos saudáveis foram sensibilizados por 24 horas com exossomos de L. braziliensis. Em seguida, essas células foram infectadas com L. Braziliensis e cultivadas por 24 horas. Observamos níveis mais elevados de IL-1β e IL-6 em culturas que foram sensibilizadas antes da infecção do que em células apenas infectadas. Além disso, a estimulação com L. braziliensis induziu a produção de IL-1β, IL-6, IL-10 0 50 100 150 200 IL-1 (pg/mL) ** ** ** * 0 250 500 750 1000 1000 2000 3000 4000 5000 6000 TNF (pg/ml) Media Exosomes L. braziliensis + Exosomes L. braziliensis * * ** 0 200 400 600 800 IL-10 (pg/mL) ** ** ** 0 500 1000 1500 2000 2500 IL-6 (pg/ml) ** * e TNF por macrófagos. Nós inibimos a secreção de exossomos por L. braziliensis antes da infecção de macrófagos e observamos que células infectadas com esses parasitas induziram menor produção de IL-1β, IL-6, IL-10 & TNF e as culturas apresentaram menor taxa de infecção do que células que foram infectadas com Leishmania normal. A estimulação com exossomos também induziu o consumo de inflamassoma NLRP3 em macrófagos e o bloqueio desses receptores resultou em níveis mais baixos de IL-6, TNF e IL- 1β. Nossos resultados sugerem que os exossomos de L. braziliensis estimulam macrófagos levando a inflamação e esses efeitos podem ser dependentes de NLRP3. |
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2023-10-20T17:54:55Z2023-10-20T17:54:55Z2022-02-21https://repositorio.ufba.br/handle/ri/38138Exossomos são organelas de 30 a 100 nm secretadas por vários tipos de células. Elas ocorrem quando a membrana endossomal invagina em corpos multivesiculares (MVB) e são secretados através da fusão de MVBs com a membrana plasmática (PM). Os exossomos de Leishmania são compostos por vários fatores de virulência, como heat shock proteins, anexinas, GP63, proteínas de sinalização e também contêm mRNAs e miRNA. Nos últimos 10 anos, foi relatado que essas vesículas manipulam ativamente a sinalização do hospedeiro e as funções das células imunes, devido aos exossomos de Leishmania serem ricos em fatores de virulência como GP63. Estudos demonstram que os exossomos de Leishmania donovani ativam tirosina-fosfatases, regulando negativamente o IFN-γ e inibindo a expressão de moléculas microbicidas como TNF e NO, criando um microambiente que favorece a proliferação parasitária. 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Nossos resultados sugerem que os exossomos de L. braziliensis estimulam macrófagos levando a inflamação e esses efeitos podem ser dependentes de NLRP3.Exosomes are 30-100nm organelles secreted by various cell types. They occur when the endosomal membrane invaginates into multivesicular bodies (MVB) and are secreted through the melding of MVBs with the plasma membrane (PM). Leishmania exosomes are composed by several proteins such as heat shock proteins, annexins, GP63, proteins with signaling activity and also contain mRNAs and miRNA. Over the past 10 years it has been reported that these vesicles actively manipulate host signaling and immune cell functions, due to the enrichment by Leishmania exosomes of virulence factors such as GP63. Studies demonstrate that Leishmania donovani exosomes activate tyrosine-phosphatases, downregulating IFN-γ and inhibiting the expression of microbicidal molecules such as TNF and NO, which creates a microenvironment that favors parasite proliferation. Despite of not having immunological memory, studies suggest that after a first stimuli mononuclear phagocytes can get “trained”, passing through epigenetic changes, and responding more effectively against a second stimuli. That way, the sensitization of macrophages with L. braziliensis exosomes, prior to its infection by this pathogen, may be associated with higher inflamatory cytokines production as well as inflammasome activation; once the pathways involved in this process would already be activated. Methods and Results: Healthy subjects’ macrophages were sensitized for 24 hours with L. braziliensis exosomes. Afterwards, these cells were infected with L. braziliensis and cultured for 24 hours. We observed higher levels of IL-1β and IL-6 in cultures that were sensitized before infection than in cells only infected. Furthermore, stimulation with L. braziliensis exosomes induced production of IL-1β, IL-6, IL-10 & TNF by macrophages. We inhibited the secretion of exosomes by L. braziliensis prior to macrophage infection and observed that cells infected with those parasites induced less production of IL-1β, IL-6, IL-10 & TNF and cultures presented lower infection rate than cells that were infected with regular Leishmania. Exosome stimulation also induced the consumption of NLRP3 inflammasome in macrophages and the blocked of these receptors resulted in lower levels of IL-6, TNF and IL- 1β. Our results suggest that L. braziliensis exosomes stimulate macrophages leading to inflammation and those effects might be NLRP3 dependent.Submitted by Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde (pos.saude@ufba.br) on 2023-10-17T10:40:41Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO MESTRADO FABIO PEIXOTO FINAL (2).pdf: 2520620 bytes, checksum: 1c0134d229da051e77a2e549077974a3 (MD5)Rejected by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br), reason: O arquivo depositado deve conter a folha de aprovação assinada pelos membros da banca, conforme norma do Repositório Institucional da UFBA. Pode reencaminhar, se desejar, a folha ou a ata de aprovação em arquivo separado junto com a versão final do trabalho. on 2023-10-20T14:17:15Z (GMT)Submitted by Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde (pos.saude@ufba.br) on 2023-10-20T15:12:18Z No. of bitstreams: 1 Fábio Peixoto-mesclado.pdf: 2552258 bytes, checksum: e6966cb1eb142ec514de19011c74c816 (MD5)Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2023-10-20T17:54:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Fábio Peixoto-mesclado.pdf: 2552258 bytes, checksum: e6966cb1eb142ec514de19011c74c816 (MD5)Made available in DSpace on 2023-10-20T17:54:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fábio Peixoto-mesclado.pdf: 2552258 bytes, checksum: e6966cb1eb142ec514de19011c74c816 (MD5) Previous issue date: 2022-02-21porUNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIAOutroUFBABrasilFaculdade de Medicina da BahiaLeishmania braziliensis, macrophage, exosomes, inflammasomeCNPQ::CIENCIAS DA SAUDELeishmania braziliensis, macrófago, exossomos, inflamassomaEvaluation of the effects of Leishmania braziliensis exosomes in the production of Inflammatory mediators by macrophagesMestrado Acadêmicoinfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionCarvalho, Lucas Pedreira dehttp://lattes.cnpq.br/7308383096084856Carvalho, Lucas Pedreira dehttp://lattes.cnpq.br/7308383096084856Oliveira, Camila Indiani dehttp://lattes.cnpq.br/5692825410779014Tavares, Natália Machadohttp://lattes.cnpq.br/8380706398761910http://lattes.cnpq.br/1058951626988354Peixoto, Fábio de Carvalhoreponame:Repositório Institucional da UFBAinstname:Universidade Federal da Bahia (UFBA)instacron:UFBAinfo:eu-repo/semantics/openAccessTEXTFábio Peixoto-mesclado.pdf.txtFábio Peixoto-mesclado.pdf.txtExtracted texttext/plain104100https://repositorio.ufba.br/bitstream/ri/38138/5/F%c3%a1bio%20Peixoto-mesclado.pdf.txt397d1bb640788293ad49d9339e623c22MD55ORIGINALFábio Peixoto-mesclado.pdfFábio Peixoto-mesclado.pdfapplication/pdf2552258https://repositorio.ufba.br/bitstream/ri/38138/3/F%c3%a1bio%20Peixoto-mesclado.pdfe6966cb1eb142ec514de19011c74c816MD53LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain1715https://repositorio.ufba.br/bitstream/ri/38138/4/license.txt67bf4f75790b0d8d38d8f112a48ad90bMD54ri/381382023-10-21 02:04:33.886oai:repositorio.ufba.br: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Repositório InstitucionalPUBhttp://192.188.11.11:8080/oai/requestopendoar:19322023-10-21T05:04:33Repositório Institucional da UFBA - Universidade Federal da Bahia (UFBA)false |
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