Produção de baculovírus recombinante para a glicoproteína E2 do arbovirus Mayaro em células de insetos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Vasconcelos, Ligia Marinho Pereira
Data de Publicação: 2016
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFABC
Texto Completo: http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=100851
Resumo: Orientadora: Profa. Dra. Maria Aparecida Sperança
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spelling Produção de baculovírus recombinante para a glicoproteína E2 do arbovirus Mayaro em células de insetosARBOVIRUS MAYAROGLICOPROTEÍNA E2PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOSSISTEMAS - UFABCOrientadora: Profa. Dra. Maria Aparecida SperançaDissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2016.O arbovírus Mayaro (MAYV), pertence ao gênero Alphavirus, família Togaviridae e grupo sorológico A. Como parte do projeto de pesquisa sobre "Arboviroses Emergentes na Amazônia Ocidental", foi isolada uma estirpe de um alphavirus Mayaro a partir de um indivíduo febril de Acrelândia, Acre. O MAYV ocorre no ambiente silvestre ou rural em áreas próximas a florestas e seu ciclo de transmissão envolve a participação de primatas não humanos, aves e mosquito Haemagogus ssp. As características patogênicas do vírus MAY em humanos são pouco compreendidas e o potencial de dispersão desses vírus e a possibilidade de participação de espécies de mosquitos do gênero Aedes em seu ciclo de transmissão fazem desse vírus um importante organismo para estudos biológicos e epidemiológicos. Devido à natureza não específica dos sinais e sintomas de doenças febris agudas causadas por MAYV, o diagnóstico clínico é difícil e pode ser confundido com outras doenças febris, como: a febre da dengue, febre do chikungunya, febre amarela e a malária. Já o diagnóstico laboratorial por isolamento viral é laborioso e depende de infraestrutura e pessoal especializado, disponível em poucos laboratórios brasileiros. O diagnóstico imunoenzimático possui limitações quanto à utilização de partículas virais infecciosas e também por produzirem reações cruzadas com vírus da mesma família. Sendo assim, com o intuito de obter antígeno recombinante específico para detecção de MAYV, este projeto teve por objetivo expressar a glicoproteína E2 do vírus em células de insetos utilizando baculovírus recombinante como vetor. A glicoproteína E2 dos alphavirus tem a função de se ligar a receptores presentes na membrana plasmática da célula alvo para a entrada do vírus através de uma vesícula endossomal. Como resultado, foi obtido o baculovírus recombinante para a glicoproteína E2 de MAYV, e a mesma foi expressa pela primeira vez em células de inseto High-FiveTM. Apesar de utilizar vetor com sinal de exportação da proteína recombinante para o meio extracelular, a glicoproteína recombinante E2 de MAYV não foi exportada, permanecendo na fração celular da cultura. Análises da estrutura tridimensional da E2 homóloga de alphavirus indicaram que esta glicoproteína apresenta um domínio transmembrana, o que justifica sua permanência na bicamada fosfolípidica da célula hospedeira.The arbovirus Mayaro (MAYV), belongs to the genus Alphavirus, family Togaviridae and serological group A. As part of the research project on "Emerging Arboviroses in the Western Amazon", a strain of Mayaro alphavirus was isolated from a febrile individual of Acrelândia, Acre. MAYV occurs in the wild or rural environment, in areas near to forests and its life cycle includes the participation of non-human primates, birds and mosquito Haemagogus ssp. The pathogenic characteristics of MAYV in humans are poorly understood and the dispersal potential of these viruses and the possibility of participation of species of Aedes mosquitos in its transmission cycle make this virus an important organism for biological and epidemiological studies. Because of the nonspecific nature of the signs and symptoms of acute febrile illness caused by MAYV, clinical diagnosis is difficult and can be confused with other infectious diseases, such as dengue fever, chikungunya fever, yellow fever and malaria. Moreover laboratory diagnosis by viral isolation is laborious and depends on infrastructure and trained personnel available in a few Brazilian laboratories. The enzyme immunoassay diagnosis has limitations on the use of infectious viral particles and also for producing cross-reactions with other virus from the same group. Thus, in order to obtain recombinant antigen for specific detection of MAYV, this project aimed to express the MAYV E2 glycoprotein in insect cells using recombinant baculovirus as vector. The E2 glycoprotein of the alphaviruses has the function of binding to receptors in the plasma membrane of the target cell for viral entry through an endosomal vesicle. The recombinant baculovirus was obtained for the MAYV E2 glycoprotein, and this protein was expressed for the first time in High- FiveTM insect cells. Despite using a vector with signal to exportation of the recombinant protein to the extracellular medium, the MAYV E2 glycoprotein was not exported, remaining in the cell fraction of the culture. Structural analyses of alphavirus E2 homologous protein indicated that the glycoprotein has a transmembrane domain, which justifies its permanence in the host cell phospholipid bilayer.Sperança, Márcia AparecidaAraujo, Daniele Ribeiro deSilva, Carlos Alberto daVasconcelos, Ligia Marinho Pereira2016info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf101 f. : il.http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=100851http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=100851&midiaext=72200http://biblioteca.ufabc.edu.br/index.php?codigo_sophia=100851&midiaext=72199Cover: http://biblioteca.ufabc.edu.br/php/capa.php?obra=100851porreponame:Repositório Institucional da UFABCinstname:Universidade Federal do ABC (UFABC)instacron:UFABCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2022-03-18T16:22:10Zoai:BDTD:100851Repositório InstitucionalPUBhttp://www.biblioteca.ufabc.edu.br/oai/oai.phpopendoar:2022-03-18T16:22:10Repositório Institucional da UFABC - Universidade Federal do ABC (UFABC)false
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