Papel de proteÃnas presentes na tinta liberada pela lesma-do-mar Aplysia dactylomela Rang 1828 nos mecanismos de defesa do animal

• Autor(a) principal: Vanessa Lucia Rodrigues Nogueira
• Data de Publicação: 2005
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC
• Texto Completo: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=3210
• topic: GastrÃpode marinho; Aplysia dactylomela; dactylomelina-P - proteÃna; Gastropods, Aplysia dactylomela; dactylomelina-P - protein; MICROBIOLOGIA

O gastrÃpode marinho Aplysia dactylomela à conhecido por liberar uma tinta pÃrpura sempre que à importunado. Como nÃo possui nenhuma estrutura externa de proteÃÃo, acredita-se que essa secreÃÃo, rica em substÃncias biologicamente ativas, participe da defesa quÃmica do animal. A tinta à composta de pigmentos, proteÃnas e substÃncias de baixa massa molecular. Os pigmentos da tinta sÃo originados de algas vermelhas, mas quanto Ãs proteÃnas, pouco à conhecido sobre a sua origem, processamento, local de armazenamento e funÃÃo no animal. Este trabalho descreve pela primeira vez a composiÃÃo protÃica da tinta e apresenta algumas caracterÃsticas fÃsico-quÃmicas e biolÃgicas da dactylomelina-P, uma proteÃna antibacteriana presente na tinta dessa lesma, alÃm de trazer informaÃÃes acerca da localizaÃÃo desta proteÃna na glÃndula de tinta. A tinta foi obtida a partir de espÃcimes encontrados na praia de Fleixeiras, Ce. A composiÃÃo de proteÃnas da tinta foi determinada por eletroforese bidimensional e a purificaÃÃo da dactylomelina-P foi feita atravÃs de cromatografias de troca iÃnica e interaÃÃo hidrofÃbica. Dactylomelina-P foi analisada quanto à massa molecular, ponto isoelÃtrico, composiÃÃo de aminoÃcidos, presenÃa de carboidratos, estabilidade tÃrmica, resistÃncia ao pH e a proteases. VÃrias atividades biolÃgicas foram testadas com a tinta e com a dactylomelina-P, incluindo atividades antimicrobianas, enzimÃticas, hemaglutinante, anticoagulante, hemolÃtica, citotÃxica e tÃxica. Os ensaios de localizaÃÃo da proteÃna foram realizados em diferentes tecidos da lesma por western blot na glÃndula de tinta por imunohistoquÃmica e a interaÃÃo com a bactÃria Staphylococcus foi feita por imunocitoquÃmica. A tinta de A. dactylomela contÃm mais de 40 proteÃnas/ peptÃdeos, com massas abaixo de 70 kDa e pIs na faixa Ãcida. A proteÃna mais abundante na tinta à a dactylomelina-P, que à uma molÃcula monomÃrica, de 59,8 kDa, pI 5,0, que possui alto teor de metionina e menos de 1% de carboidratos, à desnaturada a 60 ÂC por 10 minutos e resiste a pHs entre 3-12. Dactylomelina-P mostra um amplo espectro de aÃÃo antibacteriano, mas nÃo antifÃngico, ao contrÃrio da tinta que possui um fator com esta atividade. à particularmente eficiente contra bactÃrias marinhas, podendo ser bactericida (4,0μg/ml) ou bacteriostÃtica (0,2μg/ml), dependendo da concentraÃÃo. Dactylomelina-P aglutinou eritrÃcitos de coelho, ratos e camundongos, nÃo apresentou atividade anticoagulante, hemolÃtica e nem citotÃxica. A DL50 para camundongos ficou entre 60-100 mg/Kg, sendo considerada moderadamente tÃxica. Dactylomelina-P sà foi encontrada na glÃndula de tinta, localizando-se preferencialmente nas cÃlulas das vesÃculas produtoras. Ensaios de microscopia eletrÃnica de transmissÃo revelaram que a dactylomelina atravessa a parede celular da bactÃria S. aureus e, interage principalmente com a membrana citoplasmÃtica, provavelmente interferindo no metabolismo, ao invÃs de causar danos à cÃlula.