ExpressÃo, purificaÃÃo e caracterizaÃÃo estrutural da bdh-2 recombinante, uma espermadesina presente no plasma seminal de bode (Capra hircus)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Antonia SÃmia Fernandes do Nascimento
Data de Publicação: 2010
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC
Texto Completo: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=4513
Resumo: O cDNA da bodesina Bdh-2 presente no plasma seminal de caprino (Capra hircus) foi subclonado no vetor de expressÃo pTrcHis TOPO utilizado para transformar cÃlulas E.coli Top 10 One Shot. Os clones recombinantes foram selecionados atravÃs de crescimento em meio LB-Broth contendo 50 μg/mL de ampicilina e amplificaÃÃo do gene por PCR. A sÃntese da proteÃna recombinante rBdh-2 fusionada com cauda de histidina foi monitorada atravÃs de SDS-PAGE seguido por immunobloting usando anticorpo monoclonal anti histidina. A produÃÃo da rBdh-2 atravÃs da induÃÃo a baixas temperaturas nÃo se mostrou satisfatÃria. A maior produÃÃo da rBdh-2 ocorreu com IPTG 1,5 mM apÃs 2 horas de induÃÃo. O mÃtodo utilizado para a purificaÃÃo da proteÃna recombinante rBdh-2 foi atravÃs de cromatografia de afinidade em coluna His-Trap seguida por cromatografia de troca-iÃnica em coluna de DEAE-Sephacel. A estrutura secundÃria da rBdh-2 foi avaliada atravÃs do perfil espectral de dicroÃsmo circular (CD) que confirmou a predominÃncia de estruturas secundÃrias do tipo folhas-β, a presenÃa de um baixo conteÃdo de estruturas nÃo-ordenadas e de hÃlices-. A rBdh-2 manteve sua estrutura estÃvel atà 35 ÂC. No entanto, mudanÃas significativas foram observadas a partir de 40 ÂC referentes à descaracterizaÃÃo do espectro de CD.
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