InjÃria renal induzida pelo veneno de Bothrops insularis e o papel da molÃcula KIM-1 como biomarcador precoce

• Autor(a) principal: Rodrigo Tavares Dantas
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC
• Texto Completo: http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=19304
• topic: FARMACOLOGIA

A lesÃo renal aguda (LRA) à uma das mais importantes complicaÃÃes do envenenamento botrÃpico, sendo considerada uma das principais causas de morte nestes acidentes. A creatinina plasmÃtica vem sendo utilizada como biomarcador de injÃria renal hà mais de 90 anos, entretanto tem baixa sensibilidade e especificidade para a lesÃo renal aguda. A demanda por um teste capaz de detectar os estÃgios desta lesÃo tem estimulado a busca de novas ferramentas diagnÃsticas. Uma vez que cÃlulas tubulares epiteliais sÃo os principais alvos dos efeitos tÃxicos dos venenos, este trabalho avaliou as aÃÃes do veneno de Bothrops insulairs (BiVT) sobre a funÃÃo renal de camundongos, examinando o papel da proteÃna KIM-1 como biomarcador precoce de LRA. TambÃm foram avaliados os efeitos do BiVT apÃs incubaÃÃo com linhagens celulares renais de tÃbulos proximais de macaco e humana, LLC-MK2 e HK2, respectivamente; na ausÃncia e na presenÃa das enzimas fenantrolina e catalase. Camundongos Swiss machos pesando entre 25-30 g foram inoculados com o BiVT por via intramuscular (3,5 mg/Kg) e observados por 24 horas no modelo de gaiola metabÃlica. Urina, sangue e os rins dos animais foram coletados para anÃlise dos seguintes parÃmetros: nÃveis urinÃrio e sÃrico de creatinina, nÃvel urinÃrio da proteÃna KIM-1, anÃlise histolÃgica dos rins e avaliaÃÃo do equilÃbrio Ãxido-redutor no tecido renal. No estudo com cÃlulas tubulares renais foram avaliados a viabilidade celular, o perfil de morte celular atravÃs da marcaÃÃo com os marcadores anexina/7-AAD para avaliaÃÃo de necrose/apoptose, rodamina para avaliaÃÃo do potencial transmembrÃnico mitocondrial e DCF para avaliaÃÃo da produÃÃo de espÃcies reativas de oxigÃnio (EROs). O BiVT promoveu um aumento da creatinina plasmÃtica, reduziu a taxa de filtraÃÃo glomerular e aumentou os nÃveis urinÃrios do biomarcador KIM-1. A anÃlise histolÃgica do tecido renal revelou tumefaÃÃo mesangial, degeneraÃÃo e tumefaÃÃo glomerulares, degeneraÃÃo hidrÃpica, tumefaÃÃo tubular e edema intersticial no cÃrtex renal dos animais tratados com o BiVT. Na medula foram visualizadas as seguintes alteraÃÃes: infiltraÃÃo de cÃlulas inflamatÃrias, pequenos vasos congestos, degeneraÃÃo tubular hidrÃpica com secreÃÃo da proteÃna Tamm-Hosrsfall; e no interstÃcio, presenÃa de cÃlulas inflamatÃrias. CÃlulas LLC-MK2 incubadas com o BiVT, tiveram reduÃÃo de viabilidade, com bloqueio parcial deste efeito na presenÃa da enzima catalase. Houve um aumento do nÃmero de cÃlulas marcadas com 7-AAD, efeito nÃo observado quando na presenÃa de fenantrolina ou catalase; entretanto, a fenantrolina promoveu um aumento no nÃmero de cÃlulas com dupla marcaÃÃo e a catalase, um aumento no nÃmero de cÃlulas nÃo-marcadas. O BiVT induziu perda de potencial transmembrÃnico mitocondrial que nÃo sofreu alteraÃÃo quando incubado com fenantrolina, mas apresentou reversÃo parcial deste efeito na presenÃa da catalase. Na presenÃa do BiVT foi vista uma reduÃÃo da viabilidade das cÃlulas HK2, efeito parcialmente bloqueado na presenÃa da fenantrolina ou catalase. Houve reduÃÃo do potencial transmembrÃnico mitocondrial, efeito exacerbado pela fenantrolina e parcialmente bloqueado pela catalase. TambÃm foi visto um aumento na produÃÃo de EROs, efeito parcialmente bloqueado na presenÃa de fenantrolina ou catalase. Esses dados sugerem toxicidade do BiVT sobre o tecido renal e cÃlulas tubulares proximais.