Novas abordagens moleculares em Trypanosoma cruzi para estudos sobre a progressão e tratamento da doença de Chagas

• Autor(a) principal: Melo, Anita Lara Ferreira
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)
• Texto Completo: http://app.uff.br/riuff/handle/1/29863
• topic: doença de Chagas, Trypanosoma cruzi, Piper amalago.; Doença de Chagas, Trypanosoma cruzi, In vitro, Extrato vegetal; Chagas disease, Trypanosoma Cruzy, Piper amalago

A doença de Chagas é uma doença considerada negligenciada pela Organização Mundial da Saúde devido à falta de investimento em pesquisa, diagnóstico, tratamento e prevenção. É causada pelo parasita Trypanosoma cruzi. e transmitida principalmente por insetos triatomíneos, conhecidos como "barbeiros", mas também pode ocorrer por outras vias, como transmissão oral, congênita, transfusão sanguínea e transplante de órgãos. A doença possui uma fase aguda, que muitas vezes é assintomática, e uma fase crônica, que pode causar complicações cardíacas e digestivas. Não há tratamento eficaz contra a doença. O benznidazol é a droga usada no tratamento, apesar da sua baixa eficácia na fase cronica da doença de Chagas, em torno de 30%. Na busca por novos compostos para tratamento é necessário que sejam realizados vários testes in vitro e in vivo, e para isso é importante que seja feita a padronização de novas metodologias de avaliação, utilizando inclusive novas tecnologias. Alguns estudos científicos têm investigado o potencial de plantas da família Piperacea e especialmente o extrato de Piper amalago, e indicam que compostos presentes nessas plantas possuem propriedades antioxidantes, anti-hiperalgésicas, antiartríticas, diuréticas e apresentam atividade leishmanicida e tripanocida. Mas existem lacunas nos estudos em relação ao uso dessas plantas contra Leishmania e T. cruzi, e poucos estudos in vitro mostraram resultados promissores da atividade antiparasitária sobre promastigotas e epimastigotas, sendo necessários mais testes in vitro de avaliação da atividade dessas plantas sobre amastigotas intracelulares. Com o presente trabalho, buscamos a padronização de novas metodologias de estudo in vitro, utilizando linhagem celular epitelial LLC-MK2 como célula hospedeira e o T. cruzi clone Dm28c geneticamente modificados, e avaliação de frações da planta Piper amalago em leitor de microplaca e por microscopia automatizada, triagem de alto conteúdo (HCS). Primeiramente foi padronizada a metodologia de avaliação in vitro, utilizando células LLC-MK2 infectadas com T. cruzi clone Dm28c expressando a enzima luciferase, Dm28c-Luc, e expressando a proteína fluorescente, Dm28c-EGFP. Foi utilizado o posaconazol como curva padrão para validação de novas metodologias no leitor de microplaca associado ao HCS. Em seguida foram realizadas avaliações da atividade de quatro frações de P. amalago sobre amastigotas intracelulares, frações metanol, acetato, etanol e hexano/clorofórmio. A avaliação de citotoxicidade dos extratos de Piper amalago em células LLC-MK2 não infectadas foi realizada pelo método MTS para avaliar os extratos que possuem melhor seletividade sobre amastigotas e menos atividade sobre a célula hospedeira. Das quatro frações de extrato de P. amalago, as frações etanol, metanol e acetato apresentaram alta toxicidade sobre as células e baixa ação tripanocida nas concentrações avaliadas. Apenas a fração hexano se mostrou promissora, com melhor eficácia sobre os parasitos (IC50 em 4,5 g/mL ± 0,14 (n=2) e sem afetar consideravelmente a viabilidade das células hospedeiras (IC50= 28,35 g/mL), sendo um bom candidato para análises mais específicas, como análises cromatográficas e possível isolamento do princípio ativo.