Determinação do DNA circulante e mutação c.35g>c no gene KRAS de pacientes com glioma maligno em tratamento com o monoterpeno álcool perílico

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silva, Emanuelle de Souza Ramalho Ferreira da
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)
Texto Completo: http://app.uff.br/riuff/handle/1/30184
Resumo: Contém ilustrações, tabelas, gráficos
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spelling Determinação do DNA circulante e mutação c.35g>c no gene KRAS de pacientes com glioma maligno em tratamento com o monoterpeno álcool perílicoGliomacfDNAKRASÁlcool PerílicoDNA genômicoqPCRGliomaÁlcool perílicoDNAReação em cadeia polimeraseGliomacfDNAKRASPerillyl alcoholGenomic DNAqPCRContém ilustrações, tabelas, gráficosIntrodução: Gliomas são os tumores primários malignos mais frequentes do sistema nervoso central. O gene KRAS exerce um papel crucial na regulação das vias de sinalização intracelular, tanto que a mutação funcional pode causar transformação maligna e progressão tumoral. Objetivo: Determinar a frequência da mutação c.35G>C no gene KRAS em amostras de DNA de pacientes com glioma maligno e tumor sólido em tratamento com o monoterpeno álcool perílico (POH), um inibidor da p21Ras. Material e Métodos: A coorte incluiu 218 pacientes com glioma maligno recidivo e 65 pacientes com tumor sólido cadastrados no estudo clínico Fase I/II do tratamento com POH pela via inalatória e 330 indivíduos saudáveis como controle pareado. Análise da mutação c.35G>C no gene KRAS por PCR real-time foi feita no DNA circulante (cfDNA) do soro e/ou plasma, e DNA genômico (gDNA) de células sanguíneas, saliva e de fragmentos parafinados da lesão tumoral. Fragmentos parafinados de biopsia do tumor de 36 pacientes com glioma foram corados por imunohistoquímica para proteína oncogênica p21WAF1 inibidora da ciclina/cdk e o marcador de proliferação celular Ki 67. Os dados foram analisados por testes não paramétricos de Wilcoxon-Mann-Whitney e Kruskal-Wallis para determinação da significância (p<0,05). Resultados: Pacientes com glioma e tumor sólido apresentaram níveis elevados de cfDNA quando comparados com os indivíduos saudáveis. Porém, os controles negativos apresentaram níveis mais elevados de gDNA do que pacientes com glioma. Não se observou a presença de mutação c.35G>C KRAS nas amostras analisadas de pacientes com glioma e tumor sólido. Contudo, foi observada uma relação inversa na porcentagem de positividade de p21WAF1 e a imunomarcação para proliferação celular Ki67. Discussão: O nivel de cfDNA nos processos neoplásicos apresenta uma estreita relação com a atividade da doença e prognóstico. A ausência de mutação somática c.35G>C KRAS nas amostras analisadas sugere ser esta uma via importante na regulação da proliferação tumoral. De fato, o aumento na proliferação celular evidenciado pelo percentual elevado de Ki-67 estava associado com redução na positividade para p21WAF1. Conclusão: A análise sequencial do cfDNA mostrou que pacientes com glioma com boa resposta ao tratamento apresentaram diminuição nos níveis de cfDNA e maior sobrevida. Isto indica que cfDNA pode ser usado no monitoramento do tratamento antecipando uma possível recidiva da doença. A mutação KRAS c.35G>C parece não influenciar na progressão do glioma maligno e nem na resposta ao tratamento com o monoterpeno POH. Contudo é possível que ativação em outras vias de sinalização intracelular e/ou outra mutação somática possa estar influenciando na acentuada proliferação celular e inibição da supressão tumoralIntroduction: Gliomas are the most common malignant primary tumor of the central nervous system. KRAS gene plays a crucial role in the regulation of intracellular signaling pathways so that a functional mutation may cause malignant transformation and promote tumor progression. Aim: To determine frequency of c.35G>C KRAS polymorphism expression in DNA samples from patients with malignant glioma and solid tumors under treatment with the monoterpene perillyl alcohol (POH), a p21Ras inhibitor. Material and methods: The cohort included 218 patients with recurrent malignant glioma and 65 with solid tumor enrolled in the Phase I/II clinical trial of treatment with POH by inhalation, and 330 healthy subjects as paired control group. qPCR analysis of KRAS c.35G>C polymorphism was performed in samples from circulating DNA (cfDNA) from serum and/or plasma, and genomic DNA (gDNA) from peripheral blood cells, saliva and paraffin embedded tumor fragments. Immunohistochemistry for oncogenic protein p21WAF1 cyclin/cdk inhibitor, and Ki-67 nuclear protein as marker of cell proliferation was performed in paraffin-embedded tumor biopsy fragments of 36 glioma patients. Nonparametric Wilcoxon, Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests were applied for statistical analysis of data significance (p<0.05). Results: Patients with glioma and solid tumor showed high cfDNA levels compared to healthy individuals, but controls had higher gDNA than glioma patients. It was not observed c.35G>C KRAS mutation in DNA samples from any patient. However, immunohistochemical analysis showed that high p21Waf1 was consistently associated with low Ki-67 nuclear proliferation of glioma cells. Discussion: cfDNA level is often associated with poor prognostic and active neoplastic process. Lack of c.35G>C KRAS mutation in DNA samples from all patients suggest that RTK pathway is important for regulation of tumor proliferation. Indeed, high tumor cell proliferation (Ki-67) was associated with reduction of p21WAF1 cyclin/cdk inhibitor. Conclusion: Sequential analysis of cfDNA showed that glioma patients with good response to POH treatment and stable disease had low cfDNA levels and increased survival rate. Hence, cfDNA may be used to monitor patients’ response to POH treatment, and predicting tumor recurrence. The KRAS c.35G>C mutation does not seem to influence progression of malignant glioma and neither the response to POH. Yet, it is not ruled out that different KRAS somatic mutation and other intracellular signaling pathway could be activating cellular proliferation and inhibition of tumor suppressor.71 f.Santos, Thereza Fonseca Quíricohttp://lattes.cnpq.br/0382591463869002Kohlrausch, Fabiana Barzottohttp://lattes.cnpq.br/7152429222427739Fonseca, Clóvis Orlando Pereira dahttp://lattes.cnpq.br/4126541434625346Xavier, Analúcia Rampazzohttp://lattes.cnpq.br/1450682878713091Paiva, Carmen Lúcia Antãohttp://lattes.cnpq.br/2025330782487908Pereira, HelenaSibajev, Alexanderhttp://lattes.cnpq.br/2870505249595744http://lattes.cnpq.br/7917370002174741Silva, Emanuelle de Souza Ramalho Ferreira da2023-09-01T15:48:23Z2023-09-01T15:48:23Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfSILVA, Emanuelle de Souza Ramalho Ferreira da. 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