Caracterização do perfil protéico e da atividade mitocondrial de Trypanosoma cruzi sob o estresse de radiação gama

• Autor(a) principal: Helaine Graziele Santos Vieira
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9WMV6A
• topic: Bioquímica e Imunologia; Tripanossoma cruzi; Bioquímica; Raios gama; Proteômica; Mitocondria

O Trypanosoma cruzi e considerado um dos eucariotos mais resistentes a Radiação ionizante, suportando doses sub-letais de ate 1,0 kGy. A radiação ionizante do tipo gama promove a quebra das fitas simples e duplas do DNA, além de gerar espécies reativas de oxigênio (ROS). Apos a irradiação, os parasitos cessam o seu crescimento por ate 96 horas, retomando-o em seguida e atingindo a fase estacionaria em ate 240 horas apos irradiação. O padrão de bandas cromossomais, que são extensamente fragmentadas pela radiação, e restabelecido cerca de 48 horas apos o estresse. Para tolerar tais danos, e necessário um eficiente aparato de reconhecimento e reparo de lesões. Neste trabalho, investigamos a radioresistencia em T.cruzi, mediante a análise do seu perfil de expressão protéica e da sua atividade mitocondrial em diferentes tempos apos uma dose de 500 Gy de radiação gama. Utilizando a metodologia 2D-DIGE, foram encontrados 543 spots protéicos diferencialmente expressos apos a exposição do T. cruzi a radiação. A partir destes spots, 53 proteínas foram identificadas por espectrometria de massas (MS/MS) e classificadas de acordo com sua função biológica. Analisando a anotação funcional das 53 proteínas, observamos uma tendência para a superexpressão de proteínas com peso molecular abaixo do predito. Esta tendência indica a possível existência de modificações pos-traducionais e/ou de mecanismos de processamento das proteínas identificadas, que geraria polipeptídios mais curtos do que o predito em resposta a radiação gama. Outras tendências observadas em nossas analises de proteômica incluem alterações nos seguintes processos biológicos: regulação positiva do processo de síntese de proteínas, repressão de proteínas envolvidas no processo de enovelamento (exceto pela indução de duas chaperonas do retículo endoplasmático), repressão das vias de geração de ATP por fosforilação oxidativa, da glicolise, e do metabolismo de aminoácidos. Nossos resultados também indicam que a síntese protéica de#novo e essencial para a recuperação do T. cruzi apos o estresse por exposição a radiação gama, pois o tratamento com inibidores de tradução interfere drasticamente no retorno ao crescimento dos parasitos irradiados. Ao avaliarmos a atividade mitocondrial de T. cruzi, xvi! verificamos que parasitos irradiados produzem mais ATP do que parasitos não irradiados, alem de consumirem mais O2. Adicionalmente, a análise da expressão gênica de T. cruzi irradiado por qRT-PCR mostrou que os genes do maxicírculo mitocondrial foram induzidos apos a irradiação. Ambos os resultados indicam uma maior atividade da mitocôndria apos o estresse. Entretanto, observamos uma menor produção de H2O2 nos parasitos irradiados, indicando assim a existência de um mecanismo eficiente de eliminação de radicais livres. O presente estudo revela a resposta peculiar de T. cruzi a radiação ionizante e suscita questionamentos pertinentes sobre como este organismo e capaz de modificar seu perfil de expressão protéica e sua atividade mitocondrial para possibilitar a sobrevivência em condições tão adversas.