Caracterização biológica e molecular de tripomastigotas de Trypanosoma cruzi provenientes de células deficientes na proteína lisossomal LAMP

• Autor(a) principal: Anny Carolline Silva Oliveira
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/51245
• topic: Trypanosoma cruzi; Doença de Chagas; Proteínas LAMP; Invasão; Ambiente intracelular; Análise proteômica; TMT (tandem mass tags); Biologia celular; Doença de Chagas; Tryoanosoma cruzi; Espaço intracelular; Glicoproteínas de membrana associadas ao lisossomo

O Trypanosoma cruzi invade células fagocíticas não profissionais através da subversão do processo de reparo de membrana da célula hospedeira, o qual é dependente de lesões à membrana plasmática e sinalização celular, aumento intracelular de cálcio e recrutamento de lisossomos. Células deficientes em LAMP (Lysosome Associated Membrane Proteins – LAMP) 1 e 2, são menos permissivas à invasão pelo T. cruzi, porém mais propensas à multiplicação intracelular deste parasito. O que determina essa maior multiplicação não é conhecido. No entanto, sabe-se que várias passagens por ambientes intracelulares diferentes pode, significativamente, mudar o perfil de expressão de genes do T. cruzi. Neste trabalho, nós avaliamos se uma única passagem por fibroblastos selvagens (WT) ou deficientes em LAMP (KO) poderia influenciar a capacidade de invasão de tripomastigotas da cepa Y de T. cruzi em mioblastos L6 e fibroblastos WT. Parasitos liberados de células LAMP-2 KO (TcY-L2-/-) apresentaram maiores taxas de invasão, sinalização de cálcio e injúria à membrana celular, em mioblastos L6, quando comparados àqueles liberados de fibroblastos WT (TcY-WT) ou LAMP-1/2 KO (TcY-L1/2-/-). Por outro lado, TcY-L1/2-/- apresentou maiores taxas de invasão, sinalização de cálcio e injúria à membrana celular, em fibroblastos WT, quando comparados aos outros parasitos. TcY-WT, por outro lado, embora tenha apresentado taxas de invasão e de sinalização de cálcio intermediárias em fibroblastos WT, induziram menores níveis de injúria, reforçando que a sinalização mediada por proteínas tem também contribuição importante para a indução de sinais de cálcio pelo parasito. Estes resultados claramente demonstram que parasitos liberados de fibroblastos WT ou LAMP KO são distintos uns dos outros. Adicionalmente, a capacidade de invasão destes parasitos também pode variar dependendo de quais tipos celulares eles interagem. Como estas alterações provavelmente refletem diferenças entre as moléculas de superfície do parasito, nós também avaliamos seus subproteomas. Alguns complexos proteicos, proteínas de membrana e proteínas secretadas foram encontrados regulados, como alguns membros das famílias MASP, mucinas, trans-sialidases e GP63, os quais desempenham um importante papel durante a infecção pelo parasito.