Validação de método qualitativo para detecção de soja Roundup Ready® em grãos de soja por Nested PCR (reação em cadeia da polimerase)

• Autor(a) principal: Carolina Sheng Whei Miaw
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-98MHTB
• topic: Ensaio qualitativo; Ready®; Nested PCR; Validação intralaboratorial; Soja Roundup; Grãos de soja; Organismos geneticamente modificados; Nested-PCR; Soja; Validação de método; Alimentos geneticamente modificados; Reação em cadeia de polimerase

Diante da expansão da soja geneticamente modificada e tendo como princípio o direito básico do consumidor de acesso à informação sobre as características dos produtos ofertados, a legislação brasileira e de outros países estabelece um limite de organismos geneticamente modificados para indicação de transgenia na rotulagem de alimentos. Provas laboratoriais qualitativas, baseadas na reação em cadeia dapolimerase (PCR), têm sido recomendadas - como a Nested PCR. Contudo, a validação dos métodos qualitativos, fundamental para a comprovação da confiabilidade de resultados analíticos, representa ainda um importante ponto crítico na gestão da qualidade de laboratórios de análises de alimentos. O objetivo do presente projeto foi a validação intralaboratorial de um método qualitativo para detecção de soja Roundup Ready® (RR®) em grãos de soja por Nested PCR. Amostras de soja contendo de 0,001 a 1 % de RR®, mais o branco, foram analisadas. Técnicas de quantificação de ácido desoxirribonucleico (DNA), eletroforese em gel de agarose e fluorimetria, foram comparadas. A taxa de falsopositivos foi nula, com 100,0 % de taxas de seletividade e confiabilidade, para as duas formas de quantificação, demonstrando seletividade do método. Taxas desensibilidade e confiabilidade variaram entre 23,3 e 100,0 % (gel de agarose) e entre 30,0 e 100,0 % (fluorimetria). Foram obtidos 100,0 % de resultados positivos para todos os níveis acima de 0,030 %, indicando sensibilidade. Os limites de detecção estimados para as técnicas de eletroforese em gel de agarose e fluorimetria foram de 0,007 e 0,005 %, respectivamente. O método foi seletivo em relação aos eventos de milho Bt11 e GA21 e robusto para diferentes concentrações de DNA alvo e marcas de Taq DNA polimerase. A análise de amostras comerciais coletadas pela Vigilância Sanitária do Estado de Minas Gerais permitiu demonstrar a aplicabilidade do método. O método foi adequado para o propósito de uso, considerando-se os limites máximos preconizados para organismos geneticamente modificados na legislação nacional e internacional.