Desenvolvimento e validação de métodos analíticos para quantificação de cloroquina e primaquina em comprimidos e em plasma humano

• Autor(a) principal: Tiago Assis Miranda
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/EMCO-9MVFUB
• topic: espectrometria de massas; cloroquina; CLAE; plasma humano; CLUE; antimaláricos; primaquina; Validação de método; Cromatografia líquida de alta eficiência; Tecnologia farmaceutica; Cloroquina; Espectrometria de massa; Antimaláricos

A malária é uma doença que afeta a humanidade há tempos, acredita-se que 3,3 bilhões de pessoas vivem em áreas de risco de contaminação de malária. Embora em declínio, o quadro epidemiológico da malária no Brasil é preocupante nos dias atuais. Em 2011, foram registrados 267.045 casos no país, dos quais 87% causados pelo Plasmodium vivax. No tratamento da malária pelo P. vivax, são empregados, de acordo com o Ministério da Saúde, a cloroquina e a primaquina. É extremamente importante conhecer a farmacocinética da cloroquina e da primaquina, quando administrados simultaneamente, visando a garantia de que durante o tratamento, ambos estejam acima da concentração plasmática mínima necessária para a ação farmacológica. Concomitante a necessidades da monitorização terapêutica dos antimaláricos, o desenvolvimento e aplicação de métodos analíticos para identificação e quantificação desses fármacos, são de grande importância para avaliar e garantir a qualidade dos medicamentos comercializados e distribuídos atualmente. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver e validar métodos analíticos para quantificação simultânea de cloroquina e primaquina em comprimidos e em plasma humano. Para determinação dos fármacos em comprimidos, dois métodos analíticos foram desenvolvidos e validados: um por cromatografia à líquido de alta eficiência (CLAE) e um por cromatografia à líquido de ultra eficiência (CLUE). O método por CLAE foi realizado com coluna cromatográfica C18 (100 x 4,6 mm; 5 ìm), mantida a 25 °C. A fase móvel utilizada foi acetonitrila e solução de trietilamina a 0,1% (v/v) com pH ajustado para 3,0 com ácido fosfórico, no modo gradiente. Fluxo de fase móvel de 1000 ìL /min. O volume de injeção foi de 10 ìL e detecção por arranjo de diodos com leitura a 260 nm. O método por CLUE foi realizado com coluna cromatográfica C18 (50 x 2,1 mm; 1,9 ìm), nas mesmas condições do método por CLAE, à exceção do fluxo da fase móvel de 600 ìL/min e o volume de injeção de 7 ìL. Os métodos desenvolvidos cumpriram com os parâmetros de validação exigidos e se mostraram adequados para análises rotineiras. Desenvolveu-se, ainda, método bioanalítico por CLAE com detecção por espectrometria de massas e ionização por eletrospray no modo positivo para quantificação de cloroquina e primaquina em plasma, sendo selecionada a amodiaquina como padrão interno. Para o preparo de amostra, foi selecionado a extração líquido-líquido. A análise cromatográfica foi realizada com coluna cromatográfica ciano (150 x 4,6 mm; 5 ìm), mantida a 30 °C. Fase móvel utilizada foi metanol e solução de acetato de amônio 0,01 M com pH ajustado para 3,0 com ácido fórmico (30:70), no modo isocrático. O fluxo de fase móvel foi de 1000 ìL/min e o volume de injeção foi de 20 ìL. As transições empregadas na detecção por espectrometria de massas para cloroquina, primaquina e amodiaquina foram m/z 320,49 m/z 246,94, m/z 260,48 m/z 174,88 e m/z 356,59 m/z 282,97, respectivamente. O método demonstrou ser seletivo, além de fornecer taxas de recuperação próximas a 100% para todos os fármacos.