Internalização e tráfego da Stress Inducible Protein-1 (STI-1), um ligante da proteína prion celular

• Autor(a) principal: Fabiana Andrade Caetano
• Data de Publicação: 2006
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/SMOC-6WLPET
• topic: Chaperonas; Proteína Prion Celular; Tráfego; Proteína de ligação; Farmacologia

A proteína prion celular (PrPc) é uma glicoproteína ligada à membrana plasmática por uma âncora de GPI (glicosilfosfatidilinositol). A sua isoforma anormal (PrPsc) é uma molécula infecciosa envolvida na patogênese das doenças priônicas. A identificação de vários ligantes que interagem com PrPc tem auxiliado no entendimento das funções fisiológicas desta proteína. Um destes ligantes é a STI-1 (stress inducible protein 1), cuja interação com PrPc induz a neuroproteção e neuritogênese por distintas vias de sinalização. A STI-1 é uma co-chaperona que também pode atuar como um fator neurotrófico solúvel. Para melhor compreender as funções fisiológicas de PrPc e STI-1, estudamos a interação celular e o tráfego de STI-1. Neste trabalho caracterizamos a interação da STI-1 recombinante com células SN56, e mostramos que esta interação ocorre através de um sítio de ligação saturável e específico. Observamos que a interação da STI-1 com as células SN56 leva à internalização de STI-1. Experimentos de dupla marcação utilizando STI-1 fluorescente e clatrina-GFP mostraram que a principal via de internalização de STI-1 é independente de clatrina. Avaliamos também se a STI-1 era direcionada para endosomas primários após sofrer endocitose. Para isso utilizamos os marcadores de endosomas primários Transferrina e Rab5-GFP. Os resultados dos experimentos de co-localização entre STI-1 fluorescente e transferrina Alexa Fluor488 ou Rab5-GFP sugerem que a STI-1 não é direcionada para endosomas primários após ser internalizada. A partir deste resultado, avaliamos a presença de STI-1 em vesículas acídicas através de experimentos de dupla marcação utilizando Lysosensor Green. Os resultados mostraram alta co-localização entre STI-1 e Lysosensor, sugerindo o direcionamento de STI-1 para vesículas acídicas.Para identificarmos a identidade destas vesículas utilizamos o mutante constitutivamente ativo Rab7Q67L como marcador de endosomas tardios/lisosomas. Os experimentos de co-localização mostraram que a maior parte das vesículas positivas para STI-1 eram positivas para Rab7Q67L, sugerindo o direcionamento de STI-1 para endosomas tardios/lisosomas. Conjuntamente, os resultados deste trabalho fortemente sugerem que a STI-1 interage com um sítio específico na membrana plasmática, sendo internalizada principalmente por uma via independente de clatrina e direcionada para endosomas tardio/lisosomas sem passar por endosomas primários