Envelhecimento: papel da via de sinalização NRF2 sobre os mecanismos antioxidantes e anti-inflamatórios mediados pelo resveratrol

• Autor(a) principal: Filipe Nogueira Franco
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/64788
• topic: Envelhecimento; Estresse Oxidativo; Inflamação; Resveratrol; Nrf2; Bioquímica e imunologia; Envelhecimento; Estresse Oxidativo; Inflamação; Resveratrol; Fator 2 Relacionado a NF-E2

Uma das teorias sobre o envelhecimento provém do acúmulo da geração de radicais livres, além de um quadro inflamatório de baixo grau. Dentre essas moléculas, destacam-se as Espécies Reativas de Oxigênio (ROS) e Nitrogênio (RNS); além de citocinas pró-inflamatórias como Fator de Necrose Tumoral (TNF) e Interleucina-6 (IL-6). Nosso organismo conta com um sistema de defesa para combater essas moléculas reativas, como as enzimas Superóxido Dismutase (SOD), Catalase (CAT) e Glutationa Peroxidase (GPx). A ativação de diversas vias de transdução de sinais são as responsáveis pela eficiência desses sistemas. O resveratrol é um composto que tem demostrado atuar como um potente antioxidante e anti-inflamatório. Assim, o objetivo foi verificar se o perfil antioxidante e anti-inflamatório do resveratrol (5 µM) permanece o mesmo em leucócitos de doadores de diferentes faixas etárias. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética (CAAE: 33842420.4.0000.5149). Os indivíduos foram divididos em três grupos: 20-39, 40-59 e 60-80 anos. Após a separação dos leucócitos, foram realizados ensaios para quantificar ROS e RNS. O peróxido de hidrogênio (150 µM) foi usado como controle positivo. SOD, CAT, GPx, TNF, IL-6 e IL-10 foram quantificadas por kits comerciais. A análise das vias antioxidantes PKA, AKT/PKB, AMPK, MAPK, SIRT1 e Nrf2 foi feita através do uso de inibidores específicos. O ensaio com o gene repórter da luciferase e ELISA foram realizados para avaliar a ativação e expressão de p-Nrf2, respectivamente. A análise entre idade e tratamento foi realizada através da correlação de Pearson (*p<0,05). Os resultados mostraram que houve redução de ROS e RNS em leucócitos tratados com resveratrol em todas as idades, com menor efeito no envelhecimento. Houve aumento de CAT nos leucócitos de 20-39 anos tratados com resveratrol e aumento de SOD e GPx entre 40-80 anos. Houve correlação positiva entre a ação antioxidante do resveratrol sobre a atividade e o envelhecimento das três enzimas. Foi observado um comportamento antioxidante das vias PKA, AKT/PKB, SIRT1 e AMPK nos leucócitos de 20-59 anos. Nos leucócitos de doadores acima de 60 anos essas vias estavam silenciadas. As vias MAPK e Nrf2 foram vias ativas em todas as idades, e o resveratrol teve efeito antioxidante em ambas. Nrf2 se mostrou ativado nos leucócitos tratados com resveratrol dos doadores de todas as idades, além do aumento da proteína fosforilada. O resveratrol se mostrou eficaz em diminuir TNF e IL-6 concomitante ao aumento de IL-10, com menor efeito no envelhecimento. A dosagem com o inibidor de Nrf2 comprovou que essa via também é importante no contexto anti-inflamatório. Portanto, a via Nrf2 é um importante mecanismo bioquímico responsável pelo efeito antioxidante e anti-inflamatório do resveratrol. Esse efeito diminui no envelhecimento, mas ainda é observado. A hipótese é de que o Nrf2 atua (via fosforilação pela MAPK) na transcrição dos genes das enzimas antioxidantes e citocinas anti-inflamatórias, diminuindo os processos de estresse oxidativo e a inflamação crônica observados no envelhecimento.