Papel do receptor NOD2 na patogenia das lesões do sistema digestivo da doença de Chagas

• Autor(a) principal: Nathalie de Sena Pereira
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/34810
• topic: Doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; Forma clínica digestiva; Receptores da imunidade inata; Doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; Imunidade Inata

As formas digestiva e cardiodigestiva da doença de Chagas são observados em 2% a 15% dos pacientes na fase crônica da infecção, mas os mecanismos imunopatológicos permanecem não definidos. Embora estudos demonstrem a importância da inflamação e presença do parasita no esôfago e cólon no processo patofisiológico de geração do megacólon e megaesôfago em pacientes chagásicos crônicos. O mecanismo pelo qual os pacientes desenvolvem estas alterações anatomopatológicas não estão claros. A molécula NOD2 (Nucleotide-Binding Oligomerization Domain 2) é um receptor da imunidade inata expresso principalmente em macrófagos e células dendríticas. NOD2 também é expresso em células de Paneth e mantêm a homeostase intestinal, prevenindo a penetração de bactérias no epitélio gastrointestinal. Esse trabalho teve como objetivo avaliar o papel do receptor NOD2 na patogenia do sistema digestivo na doença de Chagas. Inicialmente a expressão de RNAm de NOD2, RIP2 (Receptor-interacting protein kinase 2) e defensinas 5 e 6 foi avaliada em células mononucleares do sangue periférico de pacientes com as formas indeterminada (n=18), cardíaca (n=17), digestiva (n=15) e cardiodigestiva (n=15) da doença de Chagas, usando a PCR em tempo real, e correlacionada ao grau de dilatação do esôfago, cólon sigmóide e reto. Os pacientes com as formas digestiva e cardiodigestiva da doença apresentaram expressão ausente ou reduzida de NOD2 e elevada expressão de RIP2 e defensina 6, quando comparados aqueles com as formas indeterminada e cardíaca. Também foi observada a correlação negativa entre a expressão de RNAm de NOD2 com o grau de dilatação do esôfago e a dimensão do sigmóide e do reto. Posteriormente camundongos C57BL/6 e NOD2-/- foram infectados com 1×103 tripomastigotas sanguíneos do isolado RN25 (obtido de paciente com a forma digestiva) e avaliada a susceptibilidade a infecção (parasitemia e mortalidade) e alterações do trato gastrointestinal (motilidade, inflamação e desnervação). Camundongos NOD2-/- apresentaram maior parasitemia do 17o ao 30o dia após infecção, quando comparado a animais C57BL/6. Ademais, fêmeas deficientes de NOD2 apresentaram redução da motilidade intestinal 15 e 180 dias após infecção, quando comparado a animais C57BL/6. A análise histopatológica do cólon dos animais NOD2-/- e C57BL/6 fêmea demonstraram focos inflamatórios discretos durante a fase aguda da infecção (19 dias após infecção). Durante a fase crônica da infecção (12 meses) ocorreu inflamação e hipertrofia da camada muscular no cólon e jejuno dos animais NOD2-/-, alterações não observadas nos camundongos C57BL/6. Em seguida, elevamos o inóculo de T. cruzi para os camundongos foi aumentado com intuito de promover o aumento da gênese de lesões do trato gastrointestinal. Devido a baixa virulência do isolado RN25, camundongos C57BL/6 e NOD2-/- fêmeas foram infectados com 5×104 tripomastigotas sanguíneos da cepa CL de T. cruzi e avaliada a susceptibilidade a infecção (parasitemia e mortalidade), alterações do trato gastrointestinal (motilidade, inflamação e desnervação) e expressão de RNAm de receptores da imunidade inata (TLR2, TLR4), fator de transcrição da resposta Th1 (T-bet), citocinas (IL-10, IL-17, TNF-, IFN-) e outros mediadores inflamatórios (iNOS e defensina A) no cólon. Animais NOD2-/- apresentam parasitemia mais elevada entre o 30o e 60o dias após a infecção, redução da motilidade intestinal durante a fase aguda da infecção e menor sobrevivência (60%) quando comparado aos animais C57BL/6 (100% de sobrevivência). Camundongos nocautes de NOD2 infectados apresentaram aumento na expressão da maioria dos mediadores inflamatórios analisados na fase aguda (15 dias após a infecção), quando comparado a animais selvagens. Entretanto, durante a fase crônica (60 dias após a infecção) foi observada a expressão dos mediadores inflamatórios no trato gastrointestinal dos animais nocautes de NOD2 e C57BL/6 infectados com a cepa CL, semelhante ao grupo de camundongos não infectados. Desta forma, a expressão deficiente de NOD2 em pacientes com a forma digestiva da doença de Chagas e o aumento de lesões com diminuição de motilidade do trato gastrointestinal em camundongos NOD2-/- experimentalmente infectados pelo isolado RN25 de T. cruzi, indicam que a ausência ou baixa expressão de RNAm de NOD2 pode estar correlacionada ao desenvolvimento da forma digestiva da doença de Chagas. Associado ao perfil genético do parasito que gera infecção persistente e discreta em diversos locais do trato gastrointestinal, que quando somadas podem atingir o nível crítico de desnervação do plexo mientérico levando a hiperexcitabilidade, descoordenação dos movimentos peristálticos e a hipertrofia.