Avaliação da resposta humoral e celular de camundongos BALB/C imunizados com a proteína rMSP1a obtida do isolado UFMG2 de Anaplasma marginale

• Autor(a) principal: Bruna Torres Silvestre
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-978KGV
• topic: Parasitologia; Parasitologia

Anaplasmose bovina é uma doença causada pela bactéria gram-negativa intraeritrocitária Anaplasma marginale, transmitida biologicamente por carrapatos ou mecanicamente por moscas hematófogas. As proteínas de superfície (MSPs) de A. marginale, são importantes para a interação do patógeno com o hospedeiro, e constituem possíveis alvos vacinais contra essa doença. As proteínas MSP1a e MSP2 apresentam maior potencial como imunógenos, sendo a MSP1a considerada uma adesina de eritrócitos bovinos e células de carrapatos. Proteínas exógenas administradas isoladamente no organismo podem apresentar baixa biodistribuição ou serem rapidamente degradadas ou eliminadas. A utilização de carreadores constitui uma alternativa para aumentar a eficiência da distribuição e a apresentação do antígeno ao sistema imune. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta imune humoral e celular de camundongos Balb/c imunizados com o fragmento recombinante da proteína MSP1a, do isolado UFMG2 de A. marginale em diferentes combinações. Um fragmento da MSP1a de 339bp, compreendendo a porção N-terminal, foi clonado em vetor pJexpress414. O produto da expressão foi purificado e a identidade da proteína foi confirmada por SDS-PAGE e Western Blot. Nanotubos de carbono de paredes múltiplas (MWNT) foram utilizados como molécula carreadora da rMSP1a na apresentação do antígeno ao sistema imune. Trinta e seis camundongos Balb/c, com idade de 6 a 8 semanas, foram divididos em seis grupos de seis animais cada (Não Imunizados, PBS, rMSP1a, MWNT, MWNT+rMSP1a e vacina completa (antígeno de A. marginale cultivado in vitro + MWNT+rMSP1a) e imunizados com três doses, via SC, intervaladas a cada 21 dias. Camundongos imunizados com a proteína rMSP1a, MWNT+rMSP1a e vacina completa produziram altos níveis de IgG anti-rMSP1a, mostrando que a ligação da rMSP1a aos MWNT não interferiu na sua conformação original. Entretanto, o grupo vacina completa apresentou títulos de anticorpos mais baixos do que os grupos rMSP1a e MWNT+rMSP1a. Não foi detectada resposta no grupo imunizado com MWNT livre. Esplenócitos dos animais imunizados com a ferramenta MWNT+rMSP1a apresentou uma maior capacidade proliferativa, além de maiores percentuais de linfócitos T CD4+/CD44+ e CD4+/CD62+. Níveis significativamente maiores de TNF- foram observados no grupo MWNT+rMSP1a em relação ao grupo PBS, e maior concentração de IL-10 foi observada no soro dos animais do grupo vacina completa. Estes resultados sugerem que a proteína rMSP1a associada a MWNT influenciou tanto no aumento da resposta de memória quanto na ativação de linfócitos.