Avaliação da influência de polimorfismos gênicos em voluntários de um estudo de bioequivalência entre duas formulações de varfarina

• Autor(a) principal: Cláudia de Souza Pedrosa
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/43424
• topic: Varfarina; Bioequivalência; Polimorfismo; CYP2C9; VKORC1; Warfarin; Bioequivalence; Polymorphism; Polimorfismo (Genética); Varfarina; Medicamentos; Equivalência terapêutica

O padrão de estudos de bioequivalência 2x2 crossover, dose única, é empregado rotineiramente para determinar a intercambialidade entre medicamentos referência e produtos genéricos. Sabe-se também que a variabilidade individual dos voluntários participantes em relação aos parâmetros cinéticos de fármacos é um fator impactante à escolha do desenho do estudo a ser conduzido. No presente trabalho, foram determinados os polimorfismos dos genótipos CYP2C9 e VKORC1 dos 31 voluntários participantes de um estudo comparativo de duas formulações de varfarina. Com os resultados cinéticos desse estudo foi avaliado o impacto da biotransformação do fármaco e os resultados individuais dos polimorfismos dos voluntários na averiguação da bioequivalência. Assim, para a quantificação de varfarina em plasma humano nos diferentes tempos de coleta, foi desenvolvida e validada uma metodologia bioanalítica e foram avaliados os diferentes polimorfismos para os genótipos citados dos voluntários participantes do estudo comparativo de bioequivalência. As análises por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas foram realizadas utilizando coluna Nova Pak C18 (150 mm x 3,9 mm), mantida a temperatura de 30ºC. A fase móvel foi composta de acetonitrila:água (80:20, v/v) com ácido fórmico e solução de amônio, na vazão de 0,600 mL/min. Os tempos de retenção típicos para varfarina e p-cloro-varfarina (padrão interno) foram 2,24 e 2,42 minutos, respectivamente. O espectrômetro de massas, equipado com fonte de electrospray positivo, foi empregado no modo de monitoramento de reação múltipla (MRM), monitorando as transições de 309,2 > 163,0 e 342,9 > 162,8, para o analito e padrão interno, respectivamente. O método de quantificação proposto demonstrou correlação significativa dos resultados (r=0,999541) na faixa de concentração de 5,0 – 1.000,0 ng/mL. Para a determinação dos polimorfismos dos genótipos CYP2C9 e VKORC1 foram utilizadas as técnicas de PCR e PCR em tempo real. Foram encontrados 7 voluntários mutantes com alelos *2 ou *3 para CYP2C9, e 4 voluntários mutantes com polimorfismo AA para VKORC1. A avaliação comparativa entre as formulações foi realizada com a construção dos intervalos de bioequivalência. Foram realizadas três comparações, entre as quais, uma considerando todos os voluntários e outras duas considerando somente os voluntários selvagens para os polimorfismos CYP2C9 e VKORC1. Os resultados obtidos neste estudo indicam que, para estes voluntários, os polimorfismos mutantes não influenciaram na conclusão da bioequivalência, pois para todos os intervalos de bioequivalência calculados, a conclusão foi pela bioequivalência entre as formulações.