Proteoma quantitativo para identificação de potenciais fatores de virulência em Leishmania infantum

• Autor(a) principal: Luiz Carlos Fialho Júnior
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/34538
• topic: Leishmania infantum; Fatores de virulência; Proteoma quantitativo; Leishmania infantum; Proteoma; Fatores de virulência

Leishmania infantum é o protozoário responsável pela Leishmaniose Visceral nas Américas e na Europa, uma doença grave, podendo ser fatal se não tratada. Os casos humanos variam de infecção subclínica, com um número indeterminado de assintomáticos em áreas endêmicas, a um quadro crescente e de alta letalidade em crianças. Em cães infectados, menos de 50% apresentam sinais clínicos da doença, no entanto, alguns sucumbem em poucos meses após a infecção. Essa ampla diversidade clínica em humanos e em caninos sugere que fatores tanto do hospedeiro quanto do parasito podem estar envolvidos na variabilidade da doença. Assim, devido a sua importância e diversidade clínico-epidemiológica em nosso país, o estudo de fatores de virulência em L. infantum se mostra bastante promissor para o entendimento da relação parasito-hospedeiro. Em um estudo anterior foi caracterizada a virulência de duas cepas (BH46 e BH400) de L. infantum, e foi observado uma maior virulência e infectividade da cepa BH400. Além disso, através da análise proteômica da forma promastigota, um total de 63 spots foram identificados correspondendo a 36 proteínas das quais, 16 já haviam sido previamente associados à virulência de Leishmania spp. Dando continuidade a essa linha de pesquisa, no presente estudo incluímos as formas amastigotas axênicas e esplênicas com o objetivo comparar a abundância diferencial de proteínas entre as cepas BH46 e BH400. Para isso, foram utilizadas duas técnicas de proteômica quantitativa: marcação por fluoróforo (DIGE) e marcação por isóbaros (TMT), seguidas de identificação por Espectrometria de Massas. Foram identificadas um total de 414 proteínas únicas que apresentaram diferença de abundância, sendo 68,4% encontradas na técnica TMT, 19% no DIGE e 12,6% em ambas as técnicas. Na forma Promastigota, foi observado um total de 270 proteínas com diferença de abundância entre as cepas. Também foram encontradas 302 e 293 proteínas diferencialmente abundantes entre as cepas nas formas Amastigota Axênica e em Amastigota Esplênica, respectivamente. Na cepa BH400, foi observado 117 proteínas com aumento de abundância em Amastigota Esplênica, enquanto 79 proteínas apresentavam diminuição. Por outro lado, em Amastigota Axênica foi observado uma maior quantidade de proteínas com abundância diminuída (178) enquanto 66 proteínas apresentaram aumento de abundância. Em Promastigota de BH400 a quantidade de proteínas com abundância aumentada (114) e diminuída (115) foi similar. A predição de interação entre as proteínas identificadas em cada forma apontou as proteínas relacionadas com tradução e proteínas de resposta ao estresse oxidativo como importantes redes. Dentre todas as proteínas com diferença de abundância, foi observado que na forma Amastigotas Axênicas, nenhum processo biológico estava enriquecido, mas simultaneamente nas formas Promastigota e Amastigota Esplênica da cepa 400 (mais virulenta) estavam enriquecidos os processos metabólicos: Celular, de Ácido Carboxílico, de Substância Orgânica, e Processo de Resposta ao Estresse. Além desses, nas formas promastigotas de 400, estavam também enriquecidos os Processos Metabólico Primário e de Biossíntese Celular. Por outro lado, simultaneamente nas formas promastigotas e amastigotas esplênicas da cepa BH46 foi observado enriquecimento do processo de biossíntese de compostos nitrogenados, enquanto nas formas amastigotas esplênicas dessa cepa estavam enriquecidos também os processos de biossíntese celular, expressão gênica e tradução. Foi observado que 14 proteínas estavam simultaneamente aumentadas em pelo menos duas formas evolutivas da cepa 400, sendo 8 delas em promastigota e amastigota esplênica, 5 em promastigota e amastigota axênica e 1 nas formas amastigotas (axênica e esplênica). Da mesma forma, 20 proteínas estavam com abundância diminuída simultaneamente em duas formas da cepa 400, sendo, 6 em promastigota e amastigota esplênica, 2 em promastigota e amastigota axênica e 12 nas formas amastigotas (axênica e esplênica). Por fim, foi observado uma maior semelhança entre a abundância das proteínas em Promastigota e Amastigota Axênica do que em Amastigota Esplênica, independente da cepa. Os resultados alcançados contribuem para o avanço no conhecimento da biologia de L. infantum, e muitas das proteínas identificadas são promissoras para o melhor entendimento da relação parasito-hospedeiro nessa espécie, principalmente no estudo de fatores de virulência.