Papel da PI3K8 no controle da contratilidade vascular no Diabetes Mellitus I: estudo funcional e eletrofisiológico

• Autor(a) principal: Jose Felippe Pinho da Silva
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-998LZM
• topic: Fisiologia e Farmacologia; Disfunção vascular; Diabetes; Fisiologia

O Diabetes está diretamente relacionado a danos em vários órgãos e sistemas incluindo o sistema vascular. Os problemas vasculares representam a principal causa de morbidade e mortalidade no Diabetes. No entanto, os mecanismos envolvidos nas alterações vasculares associadas ao diabetes não são completamente esclarecidas. O objetivo deste estudo foi investigar as vias de sinalização envolvidas na disfunção vascular em um modelo murino de diabetes tipo I induzida por streptozotocina. Método: Os experimentos funcionais foram conduzidos com a aorta torácica de camundongos C57BL/6 em um sistema de banho de órgãos. As correntes para Ca2+ foram medidas em células recém-dispersas utilizando a técnica de patch-clamp na configuração whole-cell. A expressão protéica foi medida através da técnica de Western blot. A técnica de antisense foi usada para diminuir agudamente (knockdown) a expressão da PI3Kd. Resultados: A resposta vasorelaxante não foi diferente entre os grupos controle e diabéticos. No entanto, os vasos dos animais diabéticos apresentaram uma resposta contrátil bastante aumentada em relação ao controle quando estimulados com fenilefrina ou KCl. Os dados de Western blot mostraram um aumento da expressão dos canais para cálcio dependentes de voltagem do tipo L (Cav1.2), da PI3Kd e da Rho na aorta dos animais diabéticos. Nos animais diabéticos tratados com antisense para a PI3Kd a expressão da Rho e dos Cav1.2 foi normalizada. A inibição farmacológica ou com antisense para a PI3Kd normalizou a densidade de corrente através dos Cav1.2 para o nível do controle. Os inibidores da RhoK, fasudil (10 mol/L) e Y27632 (5 mol/L) também foram efetivos em normalizar as correntes para Ca2+ através dos Cav1.2 nos animais diabéticos. Os efeitos da inibição da PI3Kd e da RhoK sobre os Cav1.2 não foram aditivos. Surpreendentemente, a nifedipina, bloqueador de Cav1.2, apesar de ter tido um efeito inibitório mais pronunciado sobre a contração dos animais diabéticos, não restaurou completamente a resposta contrátil ao nível do animal controle. Estes resultados sugerem que o aumento de corrente para cálcio através dos Cav1.2 não é o único mecanismo implicado no aumento da contratilidade vascular dos animais diabéticos. A PI3Kd e a RhoK devem agir também em outra via que controla o processo contrátil, além dos Cav1.2. A inibição (farmacológica e com antisense) da PI3Kd normalizou a resposta contrátil do animal diabético sugerindo que todos os mecanismos envolvidos na alteração contrátil do diabetes envolvem a PI3Kd. A inibição da RhoK com Y27632 praticamente aboliu a resposta contrátil do animal controle e do animal diabético, mostrando que esta via é fundamental no controle da contração na aorta dos camundongos. Conclusões e implicações: Os resultados mostram que no diabetes tipo 1 induzido por STZ ocorre uma remodelação dos mecanismos moleculares envolvidos no controle da resposta contrátil do músculo liso da aorta, incluindo o aumento da expressão da PI3Kd, Cav1.2 e Rho. No animal diabético, a PI3Kd, via Rho/RhoK, promove um aumento das correntes para cálcio através dos Cav1.2 e do grau de fosforilação dos filamentos contráteis. Dessa forma, o bloqueio da PI3Kd pode representar um novo alvo terapêutico para o tratamento das disfunções vasculares em pacientes diabéticos.