Avaliação da influência de marcadores genéticos, laboratoriais e clínicos na ocorrência de doença cerebrovascular em crianças com anemia falciforme triadas pelo programa de triagem neonatal de Minas Gerais e acompanhadas no hemocentro de Belo Horizonte da fundação hemominas

• Autor(a) principal: Andre Rolim Belisario
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-A9PECZ
• topic: -; Anemia falciforme/genética; Anemia; Transtornos cerebrovasculares; Neonatologia; Predisposição genética para doença; Triagem neonatal; Anemia falciforme/complicações; Estudos de coortes; Criança; Marcadores genéticos

A doença cerebrovascular (DCV) é uma complicação grave associada à anemia falciforme. O doppler transcraniano (DTC) anormal identifica algumas criança sob alto risco de desenvolvimento, mas outros marcadores seriam úteis. Objetivo: Este estudo de coorte tevecomo objetivo avaliar os efeitos de marcadores clínicos, laboratoriais e genéticos no risco de desenvolvimento de DCV em crianças de Minas Gerias, Brasil. Um objetivo secundário foi identificar as mutações de beta-talassemia causadoras de S-talassemia na coorte de recém nascidos do estado de Minas Gerais. Métodos: Os desfechos estudados foram acidente vascular cerebral isquêmico clinicamente manifesto (AVC) e DTC alto risco. Os possíveis marcadores genéticos foram genotipados por PCR/RFLP. Os dados clínicos e hematológicosforam retirados dos prontuários médicos das crianças. A determinação da atividade da enzima glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) foi realizada usando um ensaio enzimático colorimétrico. A análise molecular do gene HBB foi realizada por sequenciamento de DNA.Resultados: De 440 crianças, 395 (89,8%) tiveram o genótipo Hb SS, 28 (6,4%) eram Hb S0-talassemia (S0-tal), 13 (3%) eram Hb S/persistência hereditária de hemoglobina fetal e quatro (0,9%) eram Hb S+-talassemia (S+-tal). Nas crianças Hb SS, a incidência cumulativade AVC aos 8 anos de idade foi 7,4% (IC 95%, 4,66%10,14%) e a incidência cumulativa de DTC alto risco aos 11,5 anos de idade foi 14,2% (IC 95% 8,91%19,49%). Artigo 1: Nenhum efeito do polimorfismo VCAM-1 c.1238G>C no risco de AVC ou DCV foi encontrado. A incidência cumulativa de AVC foi significativamente maior em crianças com oalelo TNF- -308A (p=0,02) e menor em crianças com deleções nos genes HBA (p=0,02). Entretanto, não foi encontrada associação entre DCV e o polimorfismo TNF- -308G>A. A incidência cumulativa de DCV foi significativamente menor em crianças com deleções nosgenes HBA (p=0,004). Artigo 2: A frequência de AVC foi nula (0/83) em crianças com o genótipo ENPP1 KK, 6,8% (7/103) para crianças com o genótipo QQ e 7,7% (16/209) para crianças com o genótipo KQ (P=0,037). A probabilidade cumulativa de AVC foi significativamente maior em crianças com o genótipo QQ quando comparado com as crianças com o genótipo KK (P=0.015). Resultados semelhantes foram obtidos quando comparado os genótipos QQ/KQ versus o genótipo KK. Nenhuma associação entre GOLGB1 Y1212C ou PON1 Q192R e AVC ou risco de AVC foi encontrada. Artigo 3: O modelo multivariado finalde risco de AVC incluiu contagem de leucócitos, contagem de reticulócitos, taxa de síndrome torácica aguda e os polimorfismos TEK rs489347 e TNF- rs1800629. O modelo para DTC de alto risco incluiu contagem de reticulócitos e os polimorfismos TEK rs489347 e TGFBR3rs284875. Artigo 4: a prevalência global de deficiência molecular de G6PD foi 4,3% (IC95% 2,3%-6,3%). A média da atividade de G6PD foi 16,88 U/g Hb [erro padrão da média (EPM) 0,28] no grupo sem deficiência molecular de G6PD e 8,43 U/g Hb (EPM 1,01) no grupo comdeficiência molecular G6PD A-. A presença de deficiência molecular de G6PD não influenciou o nível médio de parâmetros hematológicos. Não foi detectado nenhum efeito da deficiência molecular de G6PD no risco de ocorrência de AVC ou DTC de alto risco. A média da atividade de G6PD foi similar nas crianças que apresentaram AVC e nas sem AVC.Resultados similares foram obtidos na análise comparando crianças que tiveram DTC de alto risco e as crianças sem DTC de alto risco. Artigo 5: Treze crianças forma incluídas, nove (69,2%) tiveram o genótipo Hb S/HPFH-2 e quatro (30,8%) tiveram Hb S/HPFH-1; onze crianças (84,6%) eram / e duas (15,4%) /-3.7. A concentração media de Hb e Hb F foi 12,52 ± 0,56 g/dl e 42,31% ± 1,97%, respectivamente. Todas as crianças tiveram DTC de baixo risco. Artigo 6: a análise dos haplótipos de IL-10 na nossa coorte mostrou que 99 (25,1%) crianças eram GCC/ATA, 85 (21,5%) ACC/ATA, GCC/ACC 79 (20%), GCC/GCC50 (12,7%) ATA/ATA 47 (11,9%), ACC/ACC 34 (8,6%), e uma (0,3%) criança apresentou um haplótipo incomum (GCC/GTA). Não houve diferença significativa nas frequências dos polimorfismos na região promotora do gene de IL-10 entre as crianças com e sem AVC ouDTC de alto risco. Do mesmo modo, nenhuma associação entre os haplótipos de IL-10 e AVC ou DTC de alto risco foi encontrada. Artigo 7: De 54 crianças S-tal, 14 (25,9%) apresentaram a mutação códon 39 (C>T), 12 (22,2%) a mutação IVS-I-1 (G>A), oito (14,8%) a mutação IVS-I-6 (T>C), cinco (9,3%) a mutação -29 (A>G TATA box), três (5,6%) amutação IVS-II-1 (G>A), três (5,6%) a mutação IVS-I-110 (G>A), duas (3,7%) a mutação - 92 (C>T), duas (3,7%) apresentaram as mutações IVS-II-844 (C>A) e IVS-II-839 (T>C) em cis, duas (3,7%) a mutação IVS-I-5 (G>A), uma (1,9%) a mutação -88 (C>T), uma (1,9%) a mutação poly A signal (T>C) e uma (1,9%) criança apresentou a mutação IVS-I-2 (T>C).Artigo 8: Duas crianças tiveram a mutação -92 (C>T) e duas apresentaram as mutações IVSII- 844 (C>A) e IVS-II-839 (T>C) em cis. A média da concentração de hemoglobina foi 12,0±0,7 g/dL e a média da concentração de hemoglobina A foi 40,4±1,1%. Todas as criançasforam oligossintomáticas e nenhum teve complicações clínicas atribuíveis à doença falciforme. As mutações -92 (C>T) e IVS-II-844 (C>A)/IVS-II-839 (T>C) associadas ao alelo S causam formas silenciosas de S+-tal. Conclusões: Nosso estudo identificou fatores derisco clínicos, laboratoriais e moleculares para o desenvolvimento de AVC e DCV em crianças com anemia falciforme da coorte de recém-nascidos do estado de Minas Gerais. Minas Gerais é o segundo estado brasileiro mais heterogêneo em termos de mutaçõescausadoras de beta-talassemia e tem um padrão relativamente diferente quando comparado com as outras regiões brasileiras.