Estudos sobre mutação em Trypanosoma cruzi: desenvolvimento de uma nova abordagem metodológica e efeitos do Cádmio

• Autor(a) principal: Carolina Furtado Torres da Silva
• Data de Publicação: 2005
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/UCSD-8FVNSF
• topic: cadmio; Trypanosoma cruzi; Tripanossoma cruzi Aspectos imunológicos; Cádmio; Bioquímica e imunologia; Mutação (Biologia)

O Trypanosoma cruzi é o protozoário agente causador da Doença de Chagas, doença que atinge cerca de 18 milhões de pessoas (WHO, 2002). Estudos biológicos, bioquímicos e moleculares indicam a existência de uma grande variabilidade genética entre as cepas deste parasita (Macedo et al, 2004). A estrutura populacional desta espécie, predominantemente clonal, com eventos raros ou ausentes de reprodução sexual (Ayala, 1993) contrasta com a alta variabilidade intra-específica e nos leva a questionar sobre o surgimento de tamanha diversidade. Acredita-se que o sistema de reparo de DNA em T. cruzi esteja envolvido nessa geração de variabilidade, já que o papel do reparo de erros de pareamento (MMR) em reduzir a taxa de mutação nos organismos já é bem conhecido (Hsieh, 2001). Foram observadas diferenças na eficiência do MMR sob condições de estresse entre diferentes linhagens de T. cruzi (Augusto-Pinto et al, 2003) o que nos levou a questionar se esta diferença seria refletida na taxa de mutação destas linhagens. Neste trabalho, realizamos estudos sobre mutações em diferentes cepas deste parasita, através da avaliação do efeito do cádmio sobre a instabilidade genética em T. cruzi e a investigação sobre possíveis diferenças na taxa de mutação entre as cepas. Desenvolvemos uma metodologia através da qual será possível determinar diretamente a taxa de mutação neste parasita, através de análise em FACS da fluorescência emitida por linhagens transfectadas com o gene gfp contendo uma mutação inserida em sua seqüência (gfp). Utilizando as linhagens transfectadas, os resultados indicam que o cádmio, na presença de água oxigenada, induz um aumento na taxa de mutação das cepas CL Brener e Colombiana. Verificamos ainda o efeito do cádmio como inibidor da atividade ATPásica da proteína recombinante TcMSH2. Por fim, foi investigada a estabilidade genômica das cepas JG, CL Brener e Colombiana expostas a cádmio e peróxido de hidrogênio por vários dias através da análise de marcadores clássicos de variabilidade em T. cruzi: microssatélites e seqüências que codificam proteínas antigênicas. Em contraste com os resultados obtidos com as linhagens expressando o gene de gfp mutado, nas condições utilizadas no tratamento concentrações dos agentes mutagênicos e período de exposição não foi possível observar a geração de mutações nos marcadores utilizados.