Clonagem e caracaterização funcional do gene da DNA polimerase de trypanosma cruzi

• Autor(a) principal: Michelle Barbi de Moura
• Data de Publicação: 2008
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/CMFC-7LLNXY
• topic: TRYPANOSOMA CRUZI; Bioquímica; Tripanossoma cruzi

As células são constantemente expostas a diversos agentes de origem endógena ou exógena que causam lesões no DNA. Como estas lesões podem gerar mutações ou causar a morte celular, as células desenvolveram complexos sistemas de reparo para minimizar os danos, mantendo assim, a integridade do genoma. Entretanto, muitas lesões podem escapar das proteínas envolvidas no reparo e bloquear a maquinaria de replicação. Uma das maneiras encontradas pelas células para contornar esta situação foi desenvolver um mecanismo para realizar a síntese de DNA passando por estas lesões. Esse processo, denominado de síntese translesão, é realizado por um conjunto de DNA polimerases adaptadas a esta função, as polimerases da família Y. Ao contrário da maioria das polimerases, a Pol é capaz de replicar eficientemente a fita de DNA frente a uma variedade de lesões, como dímeros de timina, sítios AP e 8-oxoG, de uma forma livre de erros. Neste trabalho, nós clonamos e caracterizamos o gene da Pol de Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas. O gene TcPol codifica uma proteína que contém motivos que são conservados entre as polimerases da família Y. Ensaios in vitro demonstraram que a proteína recombinante é capaz de polimerizar diferentes moldes de DNA contendo ou não lesões. Apesar de complementar o fenótipo de sensibilidade à luz UV de leveduras que tiveram o gene RAD30 mutado, a superexpressão da TcPol em T. cruzi não aumentou a sobrevivência dos parasitos após tratamento com luz UV, cisplatina ou zeocina. A superexpressão também não foi capaz de promover a retomada do crescimento dos parasitos após a irradiação gama, mas aumentou a resistência destes após o tratamento com H2O2. Estes resultados sugerem que a TcPol pode ter um papel importante na síntese translesão de lesões oxidativas remanescente na fita de DNA durante a fase S, impedindo assim, o bloqueio da replicação.