Efeito de GILZ (Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper) na migração de células mononucleares.

• Autor(a) principal: Laís Cunha Grossi Ferreira
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/52909
• topic: GILZ; Células mononucleares; Migração; Resolução da inflamação; Escherichia coli

Os macrófagos são células essenciais para a resolução da inflamação, contribuindo para a eliminação de patógenos e de células apoptóticas (eferocitose), conduzindo assim ao processo de homeostase tecidual. Estudos sobre a proteína GILZ (Glucocorticoid-induced Leucine Zipper) em modelos pré-clínicos de inflamação têm demonstrado suas ações anti-inflamatórias e pró-resolutivas. Aqui, investigamos o papel de GILZ em um evento chave de resolução da inflamação - o recrutamento não flogístico de células mononucleares. Para tal, camundongos WT receberam uma injeção intrapleural de PBS, TAT ou TAT-GILZ (uma proteína de fusão a GILZ permeável às células) e foram sacrificados em diferentes momentos. Exsudatos pleurais foram utilizados para contagem morfológica de leucócitos, fenotipagem celular, dosagens de citocinas/quimocinas e avaliação da expressão de proteínas. Em um modelo auto-resolutivo de peritonite, camundongos WT e GILZ-/- foram inoculados com 1x106 UFC de Escherichia coli e sacrificados em diferentes momentos pós-infecção. Exsudatos peritoneais foram coletados para contagem morfológica de leucócitos, fenotipagem celular, determinação da apoptose e eferocitose, mensuração de citocinas/quimocinas e determinação da carga bacteriana. Ensaios in vitro de quimiotaxia e fagocitose também foram realizados. Os dados obtidos demonstram que TAT-GILZ induziu a quimiotaxia de macrófagos RAW 264.7 e a injeção de TAT-GILZ na pleura de camundongos induziu um influxo de leucócitos dependente do tempo, composto principalmente por células mononucleares dotadas de fenótipo regulatório, apresentando maior expressão de CD206 e YM1 (marcadores do fenótipo M2). A migração dessas células foi acompanhada por aumento dos níveis de CCL2, IL-10 e TGF-β. Durante a fase de resolução da peritonite por E. coli, cuja celularidade é composta principalmente por células mononucleares, animais GILZ-/- apresentaram menor recrutamento dessas células associado com menores níveis de CCL2. Além disso, apresentaram menor número de macrófagos do fenótipo M2 e menor frequência do marcador CD206, seguido de maior carga bacteriana e menor porcentagem de neutrófilos apoptóticos e eferocitose. Ensaios de fagocitose bacteriana in vitro utilizando macrófagos derivados da medula óssea (BMDMs) ou do peritônio de animais GILZ-/- mostraram menor capacidade fagocítica quando comparadas às células de animais WT. De forma interessante, o pré-tratamento com TAT-GILZ aumentou a função fagocítica dos macrófagos de animais WT e resgatou essa função efetora em macrófagos de GILZ-/-. Em resumo, TAT-GILZ induziu recrutamento de células mononucleares dependentes de CCL2 e polarização de macrófagos para um fenótipo resolutivo/regulatório, caracterizado pelo aumento de P-STAT3, IL-10, TGF-β, CD206 e YM1. A deficiência em GILZ resultou em menor recrutamento de células mononucleares e deficiência na polarização de macrófagos para um fenótipo regulatório durante a peritonite. Além disso, o tratamento in vitro com TAT-GILZ promoveu aumento da fagocitose bacteriana.