Padronização da genotipagem de alelos dos sistemas de grupo sanguíneo Diego, Dombrock e Duffy por PRC em tempo real na Fundação Hemominas

• Autor(a) principal: Adão Rogério da Silva
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/FARB-BC6LGM
• topic: Genotipagem PRC em tempo real; Sistema Diego Sistema Dombrock; Sistema Duffy; Sistemas de grupos sanguíneos; Genótipo; Bancos de Sangue; Grupos sanguineos; Sangue Transfusão

A fenotipagem de antígenos dos sistemas considerados de maior importância clínica como ABO, Rh e Kell é rotineiramente realizada em bancos de sangue. Entretanto, na última década tem sido relatados casos de reações transfusionais hemolíticas envolvendo anticorpos de outros sistemas que nem sempre estão incluídos na rotina pré-transfusional dos bancos de sangue, incluindo o Diego e o Dombrock. A pesquisa desses sistemas é difícil, uma vez que a obtenção dos anticorpos para a caracterização dos respectivos antígenos é complexa e osreagentes comerciais geralmente não estão disponíveis. Sendo assim, as técnicas de biologia molecular tornam-se uma ferramenta valiosa, pois permitem a inferência do fenótipo a partir da análise genética. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo padronizar reações baseadas na técnica de PCR em tempo real para a genotipagem de variantes dos sistemas de grupos sanguíneos Duffy (FY*A, FY*B e FY*BES), Diego (DI*A e DI*B) e Dombrock (HY). Os resultados obtidos indicaram a ocorrência de completa concordância entre os resultados obtidos por PCR-RFLP (técnicas já descritas na literatura) e as técnicas padronizadas nesse estudo. Os testes de precisão (repetibilidade e reprodutibilidade) para as técnicas padronizadas também apresentaram resultados satisfatórios considerando que se trata de testes qualitativos, sendo que os valores médios dos coeficientes de variação para os cycle threshold nãoultrapassaram 5,6%. Os resultados dos testes de avaliação da sensibilidade analítica das técnicas padronizadas indicaram que o limite mínimo de detecção das técnicas padronizadas é compatível com as concentrações de DNA usualmente empregadas em laboratórios de biologia molecular sendo notada amplificação em concentrações de 1ng para os alelos DI*A eDI*B, e em 100pg para os alelos HY e DO. Desta forma, admite-se que as técnicas padronizadas apresentam potencial para utilização na rotina de bancos de sangue, podendo ser úteis na triagem de portadores de fenótipos de grupos sanguíneos, incluindo as variantes raras.