Vacinação de camundongos com células dendríticas derivadas de células tronco contendo o gene Rho1-GTPase de Schistosoma mansoni.

• Autor(a) principal: Luara Isabela dos Santos
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-92EGEX
• topic: Vacina; Esquistossomose; Células dendríticas; Bioquímica e imunologia

A esquistossomose permanece como uma das mais prevalentes infecções. Inúmeros estudos têm sido realizados no sentido de se obter uma vacina capaz de proteger o indivíduo da infecção pelo Schistosoma mansoni ou mesmo limitar o desenvolvimento das fêmeas assim como a supressão da produção dos ovos. No entanto, mesmo com muitos anos de pesquisa, ainda não foi encontrada uma vacina candidata. Em diferentes modelos de doença, tem sido observado que as células dendríticas (DCs) podem atuar como vetor vacinal, mediando proteção contra vários tipos de patógenos. Estudo da manipulação ex vivo das DCs podem conduzir ao desenvolvimento de vacinas que induzem a proteção imunológica a infecções a partir da apresentação de antígenos apropriados in vivo. Objetivo: Avaliar a resposta imune de camundongos vacinados com células tronco derivadas para células dendríticas e posteriormente modificadas contendo o gene Rho1-GTPase de S. mansoni. Metodologia: DCs foram obtidas a partir da maturação das células tronco com meio condicionado contendo GM-CSF e caracterizadas por citometria de fluxo e microscopia confocal. O fragmento da Rho1-GTPase foi amplificado por PCR, inserido em um vetor de expressão em células eucariotas e então transfectado nas DCs. Essas células foram usadas na vacinação de camundongos C57BL/6 submetidos à infecção desafio com cercárias. Resultados e conclusão: A fenotipagem da população celular mostrou que essas células expressavam distintos marcadores de superfície celular CD11c, característicos de células dendríticas mielóides, além das moléculas coestimulatorias CD40 e CD86. As moléculas do complexo principal de histocompatibilidade (MHC) classe I e II também foram observadas. As DCs foram visualizadas em microscopia confocal para avaliação da morfologia típica e atividade fagocítica, mostrada pela incorporação de partículas de látex fluorescentes. Uma vez clonada, analisada e transfectada, a proteína em fusão com o GFP foi expressa pelas DCs. A expressão da Rho1-GTPase foi observada a partir de transfecções eficientes e a melhor metodologia observada foi pela utilização do GeneJuice comparado a nanopartículas e ao Effectene. A análise da proteção contra S. mansoni revelou que a DC modificada induziu proteção de 56%, relativamente maior do que a conferida apenas pela mesma proteína codificada, 51%. Concluímos que a DC é uma ferramenta valiosa a ser usada no controle da esquistossomose assim como os resultados apresentados representam um avanço na produção de novas metodologias vacinais.