Avaliação do uso de proteínas recombinantes de Mycobacterium bovis como antígenos em teste intradérmico para o diagnóstico da tuberculose bovina

• Autor(a) principal: Melo, Elaine Silva de Pádua
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMS
• Texto Completo: https://repositorio.ufms.br/handle/123456789/1949
• topic: Tuberculose Bovina; Tuberculosis, Bovine; Proteínas de Ligação a DNA; DNA-Binding Proteins; Testes Intradérmicos; Intradermal Tests

A tuberculose bovina é uma doença de importância econômica e zoonótica, causada principalmente por Mycobacterium bovis. Como não existe uma vacina eficaz para essa doença, os programas para seu controle e erradicação consistem no diagnóstico e abate de animais infectados com base nos resultados do teste de imunidade celular in vivo, o teste intradérmico. Nesse ensaio são utilizados os derivados proteicos purificados (PPD) de M. bovis que são capazes de induzir reações de hipersensibilidade tardia em animais infectados. No entanto, devido a problemas relacionados principalmente à especificidade da mistura de proteínas que compõem o PPD, que pode resultar em reações cruzadas com outras micobactérias, a busca por novos antígenos se faz necessária. Nesse sentido, proteínas específicas de M. bovis envolvidas na resposta imune celular têm sido testadas em substituição ao PPD bovino no teste intradérmico, com resultados promissores. O objetivo do presente estudo foi produzir proteínas recombinantes de M. bovis e avaliá-las como antígenos em teste intradérmico em Cavia porcellus e bovinos. As proteínas recombinantes ESAT-6, PE13, PE5, ESX-1, Mb0143 e TB10.4 foram produzidas em Escherichia coli e purificadas por cromatografia de afinidade agarose-níquel em condição nativa. A proteína ESAT-6 foi purificada também em condição desnaturante. As proteínas ESAT-6, PE13, PE5 e ESX- 1, quando testadas em Cavia porcellus, apresentaram capacidade para diferenciar animais previamente sensibilizados com cepa M. bovis AN5 inativada dos não sensibilizados, quando combinadas em forma de um coquetel contendo 40 g de cada proteína. As condições de solubilização e purificação influenciaram o desempenho antigênico das proteínas em estimular hipersensibilidade tardia, pois a proteína ESAT-6 produzida em condição desnaturante desencadeou reação inespecífica nos animais não sensibilizados, enquanto que aquelas produzidas em condições nativas e aplicadas em baixas concentrações (6, 12, 24 e 48 g) induziram reações significativas nos animais sensibilizados, confirmando o seu potencial para o diagnóstico. Quando testadas em bovinos, apenas as proteínas ESX-1, Mb0143 e PE5 aplicadas individualmente, foram capazes de diferenciar bovinos sensibilizados de não sensibilizados quando 320 g das proteínas foram injetadas. As proteínas recombinantes de M. bovis aqui caracterizadas demonstraram resultado promissor para serem utilizadas como antígenos em teste intradérmico para o diagnóstico da tuberculose bovina.