Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2009 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/1519 |
Resumo: | Uma lectina da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (SejaBL) foi isolada por combinação de precipitação acetônica, fracionamento salino, cromatografia de troca iônica e gel filtração. A massa molecular de SejaBL foi determinada por SDS-PAGE e gel filtração, sendo de 52,0 kDa e 50,0 kDa, respectivamente. A lectina é uma glicoproteína com teor de carboidrato neutro de 6,94%, composta por duas subunidades com mesma massa molecular de 24 kDa. A lectina purificada hemaglutinou hemácias de coelho e humana. Glicoproteínas inibiram a hemaglutinação. SejaBL apresentou atividade máxima na faixa de pH 3,0-7,5, estabilidade térmica até 70 °C e é potencial inibidor da atividade da tripsina. Espectroscopia de fluorescência indicou a existência de superfícies hidrofóbicas. Lectina inibiu o crescimento micelial de Fusarium moniliforme e Fusarium oxysporum com um IC50 de 123±0,5μg e 303±0,9μg, respectivamente. Organismos não alvos, larvas Artemia salina e embriões de Biomphalaria glabrata, não foram afetados, indicando baixa toxicidade ambiental. Como modelo experimental, a lectina purificada de S. jacobinensis (SejaBL) foi utilizada como prova de que mudanças no centro hidrofóbico, causados pela irradiação gama, alteram estruturalmente proteínas. Para elucidar o efeito dos radicais livres nas propriedades moleculares de SejaBL atividade, estrutura terciária (intrínseca e bis-ANS fluorescência), massa molecular e perfil cromatográfico foram examinados após - irradiação em várias doses (0,020 a 35kGy). Atividade hemaglutinante específica (AHE), na lectina irradiada, mostrou perda significativa (p<0,05) acima de 12,5kGy e aumento significativo (p<0,05) em 0,1, 0,8 e 1kGy. Espectroscopia de fluorescência indicou supressão da emissão de fluorescência quando excitado a 280 e 295nm, com elevada ligação do bis-ANS, após altas doses. SDS-PAGE e HPLC-RP mostraram fragmentação polipeptídica. Mudança significativa na superfície hidrofóbica indicou captação de hidrogênio radical em aminoácidos, causando desorganização estrutural da lectina. Flavonóides são produtos secundários de plantas com capacidade para capturar radicais livres. A lectina da entrecasca de S. jacobinensis (SejaBL), proteína capaz de ligar a carboidrato, tem sua superfície hidrofóbica modificada por radicais livres produzidos pela água radiólise. No presente estudo, o efeito protetor sobre a proteína pela estabilidade antioxidante de flavonóides da entrecasca de S. jacobinensis (SejaBF), após irradiação gama, foi investigada. Dois flavonóides foram isolados com rápida recuperação da capacidade para capturar radical mensurado pelo 2,2-difenil-1-picrilhidracilo radical (DPPH) a 0,5 mg/mL, após alta dose de irradiação. Os danos causados por irradiação na AH foi minimizado em 55% na presença dos flavonóides. Os resultados mostraram radioestabilidade da capacidade antioxidante de SejaBF, protegendo a lectina de radicais livres após irradiação |
id |
UFPE_1df6d4313eaf8aa3b4cb0326ff669d4b |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repositorio.ufpe.br:123456789/1519 |
network_acronym_str |
UFPE |
network_name_str |
Repositório Institucional da UFPE |
repository_id_str |
2221 |
spelling |
Fernando de Melo Vaz, AntônioTereza dos Santos Correia, Maria 2014-06-12T15:50:49Z2014-06-12T15:50:49Z2009-01-31Fernando de Melo Vaz, Antônio; Tereza dos Santos Correia, Maria. Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados. 2009. Dissertação (Mestrado). Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Fisiologia, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2009.https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/1519Uma lectina da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (SejaBL) foi isolada por combinação de precipitação acetônica, fracionamento salino, cromatografia de troca iônica e gel filtração. A massa molecular de SejaBL foi determinada por SDS-PAGE e gel filtração, sendo de 52,0 kDa e 50,0 kDa, respectivamente. A lectina é uma glicoproteína com teor de carboidrato neutro de 6,94%, composta por duas subunidades com mesma massa molecular de 24 kDa. A lectina purificada hemaglutinou hemácias de coelho e humana. Glicoproteínas inibiram a hemaglutinação. SejaBL apresentou atividade máxima na faixa de pH 3,0-7,5, estabilidade térmica até 70 °C e é potencial inibidor da atividade da tripsina. Espectroscopia de fluorescência indicou a existência de superfícies hidrofóbicas. Lectina inibiu o crescimento micelial de Fusarium moniliforme e Fusarium oxysporum com um IC50 de 123±0,5μg e 303±0,9μg, respectivamente. Organismos não alvos, larvas Artemia salina e embriões de Biomphalaria glabrata, não foram afetados, indicando baixa toxicidade ambiental. Como modelo experimental, a lectina purificada de S. jacobinensis (SejaBL) foi utilizada como prova de que mudanças no centro hidrofóbico, causados pela irradiação gama, alteram estruturalmente proteínas. Para elucidar o efeito dos radicais livres nas propriedades moleculares de SejaBL atividade, estrutura terciária (intrínseca e bis-ANS fluorescência), massa molecular e perfil cromatográfico foram examinados após - irradiação em várias doses (0,020 a 35kGy). Atividade hemaglutinante específica (AHE), na lectina irradiada, mostrou perda significativa (p<0,05) acima de 12,5kGy e aumento significativo (p<0,05) em 0,1, 0,8 e 1kGy. Espectroscopia de fluorescência indicou supressão da emissão de fluorescência quando excitado a 280 e 295nm, com elevada ligação do bis-ANS, após altas doses. SDS-PAGE e HPLC-RP mostraram fragmentação polipeptídica. Mudança significativa na superfície hidrofóbica indicou captação de hidrogênio radical em aminoácidos, causando desorganização estrutural da lectina. Flavonóides são produtos secundários de plantas com capacidade para capturar radicais livres. A lectina da entrecasca de S. jacobinensis (SejaBL), proteína capaz de ligar a carboidrato, tem sua superfície hidrofóbica modificada por radicais livres produzidos pela água radiólise. No presente estudo, o efeito protetor sobre a proteína pela estabilidade antioxidante de flavonóides da entrecasca de S. jacobinensis (SejaBF), após irradiação gama, foi investigada. Dois flavonóides foram isolados com rápida recuperação da capacidade para capturar radical mensurado pelo 2,2-difenil-1-picrilhidracilo radical (DPPH) a 0,5 mg/mL, após alta dose de irradiação. Os danos causados por irradiação na AH foi minimizado em 55% na presença dos flavonóides. Os resultados mostraram radioestabilidade da capacidade antioxidante de SejaBF, protegendo a lectina de radicais livres após irradiaçãoCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorporUniversidade Federal de PernambucoAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccesslectinabis-ANSfluorescênciaatividade antifúngicatoxicidade ambientalradiação gamaflavonóidescapacidade de capturar radical DPPHPurificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isoladosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILafmv.pdf.jpgafmv.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1272https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/1519/4/afmv.pdf.jpg41d659b643064bcc5d8daa24abf5568fMD54LICENSElicense.txttext/plain1748https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/1519/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINALafmv.pdfafmv.pdfapplication/pdf4425739https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/1519/2/afmv.pdf289a6a31320f37bebc5b28751154136cMD52TEXTafmv.pdf.txtafmv.pdf.txtExtracted texttext/plain201462https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/1519/3/afmv.pdf.txtfc7616c3b6c88c4938c9e6b5d71a304dMD53123456789/15192019-10-25 11:29:49.465oai:repositorio.ufpe.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufpe.br/oai/requestattena@ufpe.bropendoar:22212019-10-25T14:29:49Repositório Institucional da UFPE - Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)false |
dc.title.pt_BR.fl_str_mv |
Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados |
title |
Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados |
spellingShingle |
Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados Fernando de Melo Vaz, Antônio lectina bis-ANS fluorescência atividade antifúngica toxicidade ambiental radiação gama flavonóides capacidade de capturar radical DPPH |
title_short |
Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados |
title_full |
Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados |
title_fullStr |
Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados |
title_full_unstemmed |
Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados |
title_sort |
Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados |
author |
Fernando de Melo Vaz, Antônio |
author_facet |
Fernando de Melo Vaz, Antônio |
author_role |
author |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Fernando de Melo Vaz, Antônio |
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv |
Tereza dos Santos Correia, Maria |
contributor_str_mv |
Tereza dos Santos Correia, Maria |
dc.subject.por.fl_str_mv |
lectina bis-ANS fluorescência atividade antifúngica toxicidade ambiental radiação gama flavonóides capacidade de capturar radical DPPH |
topic |
lectina bis-ANS fluorescência atividade antifúngica toxicidade ambiental radiação gama flavonóides capacidade de capturar radical DPPH |
description |
Uma lectina da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (SejaBL) foi isolada por combinação de precipitação acetônica, fracionamento salino, cromatografia de troca iônica e gel filtração. A massa molecular de SejaBL foi determinada por SDS-PAGE e gel filtração, sendo de 52,0 kDa e 50,0 kDa, respectivamente. A lectina é uma glicoproteína com teor de carboidrato neutro de 6,94%, composta por duas subunidades com mesma massa molecular de 24 kDa. A lectina purificada hemaglutinou hemácias de coelho e humana. Glicoproteínas inibiram a hemaglutinação. SejaBL apresentou atividade máxima na faixa de pH 3,0-7,5, estabilidade térmica até 70 °C e é potencial inibidor da atividade da tripsina. Espectroscopia de fluorescência indicou a existência de superfícies hidrofóbicas. Lectina inibiu o crescimento micelial de Fusarium moniliforme e Fusarium oxysporum com um IC50 de 123±0,5μg e 303±0,9μg, respectivamente. Organismos não alvos, larvas Artemia salina e embriões de Biomphalaria glabrata, não foram afetados, indicando baixa toxicidade ambiental. Como modelo experimental, a lectina purificada de S. jacobinensis (SejaBL) foi utilizada como prova de que mudanças no centro hidrofóbico, causados pela irradiação gama, alteram estruturalmente proteínas. Para elucidar o efeito dos radicais livres nas propriedades moleculares de SejaBL atividade, estrutura terciária (intrínseca e bis-ANS fluorescência), massa molecular e perfil cromatográfico foram examinados após - irradiação em várias doses (0,020 a 35kGy). Atividade hemaglutinante específica (AHE), na lectina irradiada, mostrou perda significativa (p<0,05) acima de 12,5kGy e aumento significativo (p<0,05) em 0,1, 0,8 e 1kGy. Espectroscopia de fluorescência indicou supressão da emissão de fluorescência quando excitado a 280 e 295nm, com elevada ligação do bis-ANS, após altas doses. SDS-PAGE e HPLC-RP mostraram fragmentação polipeptídica. Mudança significativa na superfície hidrofóbica indicou captação de hidrogênio radical em aminoácidos, causando desorganização estrutural da lectina. Flavonóides são produtos secundários de plantas com capacidade para capturar radicais livres. A lectina da entrecasca de S. jacobinensis (SejaBL), proteína capaz de ligar a carboidrato, tem sua superfície hidrofóbica modificada por radicais livres produzidos pela água radiólise. No presente estudo, o efeito protetor sobre a proteína pela estabilidade antioxidante de flavonóides da entrecasca de S. jacobinensis (SejaBF), após irradiação gama, foi investigada. Dois flavonóides foram isolados com rápida recuperação da capacidade para capturar radical mensurado pelo 2,2-difenil-1-picrilhidracilo radical (DPPH) a 0,5 mg/mL, após alta dose de irradiação. Os danos causados por irradiação na AH foi minimizado em 55% na presença dos flavonóides. Os resultados mostraram radioestabilidade da capacidade antioxidante de SejaBF, protegendo a lectina de radicais livres após irradiação |
publishDate |
2009 |
dc.date.issued.fl_str_mv |
2009-01-31 |
dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2014-06-12T15:50:49Z |
dc.date.available.fl_str_mv |
2014-06-12T15:50:49Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/masterThesis |
format |
masterThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.citation.fl_str_mv |
Fernando de Melo Vaz, Antônio; Tereza dos Santos Correia, Maria. Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados. 2009. Dissertação (Mestrado). Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Fisiologia, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2009. |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/1519 |
identifier_str_mv |
Fernando de Melo Vaz, Antônio; Tereza dos Santos Correia, Maria. Purificação, caracterização de uma lectina e compostos fenólicos da entrecasca de Sebastiania jacobinensis (Muill. Arg.): efeito de radiação gama sobre estrutura-atividade protéica e proteção de flavonóides isolados. 2009. Dissertação (Mestrado). Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Fisiologia, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2009. |
url |
https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/1519 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ info:eu-repo/semantics/openAccess |
rights_invalid_str_mv |
Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal de Pernambuco |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal de Pernambuco |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da UFPE instname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) instacron:UFPE |
instname_str |
Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) |
instacron_str |
UFPE |
institution |
UFPE |
reponame_str |
Repositório Institucional da UFPE |
collection |
Repositório Institucional da UFPE |
bitstream.url.fl_str_mv |
https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/1519/4/afmv.pdf.jpg https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/1519/1/license.txt https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/1519/2/afmv.pdf https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/1519/3/afmv.pdf.txt |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
41d659b643064bcc5d8daa24abf5568f 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 289a6a31320f37bebc5b28751154136c fc7616c3b6c88c4938c9e6b5d71a304d |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UFPE - Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) |
repository.mail.fl_str_mv |
attena@ufpe.br |
_version_ |
1802310753328300032 |