Caracterização gênica e proteica de citocinas inflamatórias em pacientes com anemia falciforme durante e após crise vaso-oclusiva

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: SOBREIRA, Marcondes José de Vasconcelos Costa
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPE
Texto Completo: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/43318
Resumo: As crises vaso-oclusivas (CVO) são a principal causa de morbidade nos portadores de anemia falciforme. A produção desbalanceada de citocinas contribui com o progresso da vaso-oclusão, sendo sua caracterização importante para melhor compreensão da fisiopatologia da doença. Desse modo, este trabalho visa descrever o perfil de expressão gênica e proteica das citocinas IL-1β, IL-6, IL-8 e TNF-α pelos granulócitos polimorfonucleares (PMN) e células mononucleares (CM) nos pacientes durante e após crise vaso-oclusiva. Foram analisados 46 pacientes com anemia falciforme, divididos em controles estáveis e caso, subdivididos em pacientes em crise e pós crise. Foi realizada separação de CM e PMN pela técnica de Ficoll-Hypaque para posterior extração do mRNA, seguida da síntese do cDNA para realização de qPCR pelo sistema TaqMan®. As dosagens séricas foram realizadas pela técnica de ELISA. Os resultados mostraram que apenas os PMN, em ambos os pacientes em crise e pós-crise, apresentaram maior expressão das quatro citocinas quando comparados ao grupo controle (0,0001 ≤ p ≤ 0,0381). Além disso, quando os mesmos pacientes em crise e pós crise foram comparados entre si, somente a IL-6 apresentou-se mais elevada após a crise (p=0,0175) para os PMN, demonstrando que estes são os principais moduladores das CVOs, com alta expressão de IL-6. Somente a IL-8 apresentou dosagem compatível com os limites do kit, estando consideravelmente elevada na crise em comparação com os pacientes controle (P=0,0009).
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Desse modo, este trabalho visa descrever o perfil de expressão gênica e proteica das citocinas IL-1β, IL-6, IL-8 e TNF-α pelos granulócitos polimorfonucleares (PMN) e células mononucleares (CM) nos pacientes durante e após crise vaso-oclusiva. Foram analisados 46 pacientes com anemia falciforme, divididos em controles estáveis e caso, subdivididos em pacientes em crise e pós crise. Foi realizada separação de CM e PMN pela técnica de Ficoll-Hypaque para posterior extração do mRNA, seguida da síntese do cDNA para realização de qPCR pelo sistema TaqMan®. As dosagens séricas foram realizadas pela técnica de ELISA. Os resultados mostraram que apenas os PMN, em ambos os pacientes em crise e pós-crise, apresentaram maior expressão das quatro citocinas quando comparados ao grupo controle (0,0001 ≤ p ≤ 0,0381). Além disso, quando os mesmos pacientes em crise e pós crise foram comparados entre si, somente a IL-6 apresentou-se mais elevada após a crise (p=0,0175) para os PMN, demonstrando que estes são os principais moduladores das CVOs, com alta expressão de IL-6. Somente a IL-8 apresentou dosagem compatível com os limites do kit, estando consideravelmente elevada na crise em comparação com os pacientes controle (P=0,0009).CAPESVaso-occlusive crises (CVO) are the main cause of morbidity in patients with sickle cell anemia. The unbalanced production of cytokines contributes to the progress of vaso- occlusion, and its characterization is important for a better understanding of the pathophysiology of the disease. Thus, this work aims to describe the gene and protein expression profile of the cytokines IL-1β, IL-6, IL-8 and TNF-α by polymorphonuclear granulocytes (PMN) and mononuclear cells (CM) in patients during and after vaso- occlusive crisis. 46 patients with sickle cell anemia were analyzed, divided into stable and case controls, subdivided into crisis and post crisis patients. Separation of CM and PMN was performed using the Ficoll-Hypaque technique for subsequent extraction of the mRNA, followed by the synthesis of the cDNA to perform qPCR by the TaqMan® system. Serum measurements were performed using the ELISA technique. The results showed that only PMN, in both crisis and post-crisis patients, showed greater expression of the four cytokines when compared to the control group (0.0001 ≤ p ≤ 0.0381). In addition, when the same patients in crisis and post crisis were compared to each other, only IL-6 was higher after the crisis (p = 0.0175) for PMN, demonstrating that these are the main modulators of CVOs, with high expression of IL-6. Only IL-8 showed dosage compatible with the kit limits, being considerably elevated in the crisis compared to control patients (P = 0.0009).porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em GeneticaUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessAnemia falciformeCitocinasFisiopatologiaCaracterização gênica e proteica de citocinas inflamatórias em pacientes com anemia falciforme durante e após crise vaso-oclusivainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALDISSERTAÇÃO Marcondes José de Vasconcelos Costa Sobreira.pdfDISSERTAÇÃO Marcondes José de Vasconcelos Costa Sobreira.pdfapplication/pdf1603348https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/43318/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Marcondes%20Jos%c3%a9%20de%20Vasconcelos%20Costa%20Sobreira.pdfffdf69fbb58e76f422236640f8c2c6f1MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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