Avaliação da citotoxicidade e da indução de apoptose de adutos da reação Morita-Baylis-Hillman derivados da isatina em células tumorais

• Autor(a) principal: SOUZA, Júlia Leite Cordeiro de
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFPE
• dARK ID: ark:/64986/00130000005s3
• Texto Completo: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/43784
• topic: Câncer; Isatina; Citotoxicidade

O câncer é um grupo extenso de doenças que apresentam em comum o crescimento desordenado de células anormais que são capazes de se difundir para tecidos e órgãos adjacentes e, de acordo com a Organização Mundial de Saúde, espera-se um aumento de 49,7% nos casos de câncer até o ano de 2040. Atualmente, a terapia antitumoral enfrenta diversos desafios devido ao surgimento de resistência do tumor ao fármaco, bem como diversos efeitos colaterais indesejados, tornando urgente a busca por novos compostos mais ativos e seletivos. Nesse contexto, a Reação Morita-Baylis-Hillman se mostrou promissora enquanto fonte de moléculas com atividade biológica, entre as quais, já é descrito que adutos derivados de isatina apresentaram citotoxicidade diante células leucêmicas e de carcinoma de pulmão. Neste trabalho buscamos identificar a atividade citotóxica de 21 adutos derivados de isatina frente a seis linhagens tumorais (MCF-7, HEP-2, HepG2, HL60, K562 e NCI H292), nos quais os 8 mais promissores foram testados em células mononucleares do sangue periférico (CMSP). As CI50s determinadas pelo método do MTT após 72h para células tumorais dos adutos mais citotóxicos variaram entre 0,044uM e 29,25uM enquanto que em CMSP variou entre 2,75uM e 19,25 uM. Após a determinação do índice de seletividade, optou-se por dar continuidade aos experimentos com os dois adutos mais ativos e seletivos na linhagem tumoral de leucemia mieloide crônica, K562. São eles: MBH 6 e MBH 9. Foi realizado o teste de exclusão por azul de tripan, no qual foi constatado que, apesar de mais ativo após 72 h, o aduto MBH 9 apresenta uma resposta mais tardia quando comparada ao aduto MBH 6, que já este demonstrou a citotoxicidade significativa a partir das primeiras 24h. Essa afirmação é respaldada através das alterações morfológicas analisadas que constatam indicativos de condensação de cromatina nas células testadas com 16uM do aduto MBH 6 já nas primeiras 24h de tratamento que se intensificaram com 48h e 72h de tratamento para MBH6 e MBH9. Foram realizados ensaios em citometria, nos quais foi possível observar significativa fragmentação de DNA (p<0,05) em todas as concentrações de ambos adutos testados, bem como uma redução da proliferação celular na fase S/G2/M do ciclo celular (p<0,05). Por fim, foram realizados ensaios de Western Blot que possibilitou a observação de uma redução significativa (p<0,05) das proteínas anti-apoptóticas MCL-1 e BCL-XL nas células K562 tratadas por 24h com os adutos MBH 6 e MBH 9 e uma diminuição significativa (p<0,05) da Caspase-3 total nas concentrações de 6uM e 12uM do MBH 9, bem como na concentração de 16uM da MBH6 sugerindo que estes adutos são capazes de induzir apoptose em K562.