Guignardia citricarpa, G. mangiferae E Phyllosticta spinarum : caracterização morfológica, SCARs e RNA dupla fita

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Kava, Vanessa
Data de Publicação: 2004
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/82645
Resumo: Orientador: Prof. Dr. João Lúcio de Azevedo
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spelling Glienke, Chirlei, 1970-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em GenéticaAzevedo, João Lucio deKava, Vanessa2023-05-17T15:17:20Z2023-05-17T15:17:20Z2004https://hdl.handle.net/1884/82645Orientador: Prof. Dr. João Lúcio de AzevedoCoorientadora: Profa. Dra. Chirlei Glienke de BlancoTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 2004Inclui referências: p. 99-116Área de concentração: GenéticaResumo: O fungo Guignardia citricarpa vem sendo identificado como causador da Mancha Preta de Citros (MPC). Espécies relacionadas, como G. mangiferae e Phyllosticta spinarum, também vêm sendo isoladas de citros, geralmente de forma assintomática, não sendo associadas à doença. Este trabalho teve como objetivo principal contribuir para o conhecimento da biologia destas três espécies de fungos. Para a caracterização morfológica de dez linhagens de G. citricarpa, dez de G. mangiferae e cinco de P. spinarum foram utilizados dois meios de cultura: Meio Completo (MC) e Batata Dextrose Agar (BDA). Diferentes condições de cultivo foram utilizadas para otimizar a produção de micélio (crescimento radial) e de esporos em uma linhagem de G. citricarpa e em uma de P. spinarum. Foram utilizados MC, meio V8 e BDA, em duas condições de luminosidade: 12 ou 24 horas de luz. Foi observado que o MC proporcionou um crescimento radial 20% maior que o segundo melhor meio (V8) para as duas linhagens e que com fotoperíodo de 12 horas o crescimento radial foi 14% maior para G. citricarpa e 26% maior para P. spinarum. A melhor produção de esporos para a linhagem de P. spinarum foi obtida com o meio BDA (37% superior a do V8, o segundo melhor meio) e para a linhagem de G. citricarpa foi com o MC seguido com mínima diferença pelo BDA. Linhagens de G. citricarpa, G. mangiferae e P. spinarum foram investigadas com o objetivo de identificar RNA dupla fita e partículas semelhantes a vírus. Das 22 linhagens de G. citricarpa investigadas, nove apresentaram uma banda de RNAdf com o mesmo tamanho (3100pb). Uma linhagem desta espécie foi submetida à microscopia eletrônica de transmissão (MET) e partículas semelhantes a vírus de aproximadamente 40 nm foram identificadas. Estas linhagens devem estar infectadas com vírus da família Totiviridae. Dados morfométricos obtidos anteriormente e morfológicos foram utilizados para comparação de linhagens com RNAdf e sem RNAdf. Quanto à morfologia, taxa de crescimento e tamanho de conídios e espermácios, não foram observadas diferenças entre os dois grupos, porém, a produção de conídios foi maior para o grupo com RNAdf. Das 22 linhagens de G. mangiferae analisadas, apenas uma apresentou duas bandas de RNAdf (2700pb e 1500pb). É provável que esta linhagem esteja infectada com um vírus da família Partitiviridae. Das cinco linhagens de P. spinarum investigadas, quatro linhagens apresentaram duas ou três bandas de RNAdf (1800pb a 1000pb). Uma linhagem desta espécie foi submetida à MET e partículas virais de aproximadamente 30 nm foram identificadas. Com base nestes resultados, sugerese que estas linhagens estão infectadas com vírus das famílias Partitiviridae e/ou Chrysoviridae. Três marcadores moleculares obtidos anteriormente por RAPD, sendo um para G. mangiferae e os outros dois para G. citricarpa, foram seqüenciados. A partir das seqüências obtidas, oligonucleotídeos iniciadores foram desenhados com a finalidade de converter estes marcadores em SCARs. Também foi feita uma seleção por meio de RAPD e PCR de uma linhagem de G. citricarpa para a construção de uma biblioteca genômica.Abstract: The fungus Guignardia citricarpa has been identified as the pathogen of the Citrus Black Spot disease. Related species such as G. mangiferae and Phyllosticta spinarum have also been isolated from citrus, usually as a symptomless presence, thus not being associated with the disease. The main objective of this research was to contribute to the biological knowledge of these three species of fungi. A morphological characterization of ten strains of G. citricarpa, ten strains of G. mangiferae and five strains of P. spinarum was made using two growth media: Complete Medium (CM) and Potato Dextrose Agar (PDA). Different cultivation conditions, combining three growth media (CM, V8 and PDA) in two luminosity standards (12 or 24 hours of light), were used to optimize the production of mycelium and spores in a strain of G. citricarpa and in a strain of P. spinarum. It was observed that the CM medium provided for both strains a mycelium radial growth 20% higher than that of the second best medium (V8). The radial growth achieved with 12 hours of light was 14% higher for G. citricarpa and 26% higher for P. spinarum. The best production of spore for P. spinarum was obtained with PDA medium (37% higher than that of V8, the second best medium). For the strain of G. citricarpa the best result was found with CM closely followed by PDA. Strains of G. citricarpa, G. mangiferae and P. spinarum were investigated with the purpose of identifying double-stranded RNA and virus-like particles. Among the 22 strains of G. citricarpa analyzed, nine presented a unique dsRNA segment with the same size (3100bp). A strain of this species was submitted to transmission electronic microscopy (TEM) and virus-like particles of approximately 40 nm were identified. Based on these results, it was possible to suggest that these strains are infected with a Totiviridae family virus. Morphological and previously obtained morphometrical data were used to compare strains with dsRNA and without dsRNA. Differences in morphology, growth rate and size of conidia and spermatia were not observed between these two groups, although, the production of conidia was higher in the dsRNA group. From the 22 analyzed strains of G. mangiferae, only one contained two bands of dsRNA (2700bp and 1500bp). This strain is probably infected with a virus from the Partitiviridae family. Among the five investigated strains of P. spinarum, four strains contained two or three bands of dsRNA (1800bp to 1000bp). A strain of this species was submitted to transmission electronic microscopy (TEM) and virus-like particles of approximately 30 nm were identified. Based on these results, it is suggested that these strains are infected with viruses of the Partitiviridae and/or Chrysoviridae families. Three earlier obtained RAPD markers, one of which was from G. mangiferae and the others being from G. citricarpa, were sequenced. From the resulting sequences, primers were designed to convert these markers in SCARs. A strain of G. citricarpa was also selected through RAPD and PCR data, with the purpose of building a genomic library.130f. : il., algumas color., grafs., tabs.application/pdfDisponível em formato digitalGenéticaTesesGenéticaGuignardia citricarpa, G. mangiferae E Phyllosticta spinarum : caracterização morfológica, SCARs e RNA dupla fitainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALD - T - VANESSA KAVA CORDEIRO.pdfapplication/pdf11773853https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/82645/1/D%20-%20T%20-%20VANESSA%20KAVA%20CORDEIRO.pdf8ec291c23a56cc8573da1ed0e4cf3a4cMD51open access1884/826452023-05-17 12:17:20.886open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/82645Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082023-05-17T15:17:20Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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