Purificação e caracterização da D-Gliceraldeido-3-Fosfato desidrogenase de rim de hamster e células BHK-21 (Baby Hamster Kidney)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Loureiro, Helena Maria Simonard
Data de Publicação: 1993
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/83721
Resumo: Orientadora: Prof.ª Dr.ª Momoyo Nakano
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spelling Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)Nakano, MomoyoLoureiro, Helena Maria Simonard2023-08-03T18:08:17Z2023-08-03T18:08:17Z1993https://hdl.handle.net/1884/83721Orientadora: Prof.ª Dr.ª Momoyo NakanoDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Bioquímica, Curso de Pós-Graduação em BioquímicaInclui referências: p. 57-71Resumo: No presente trabalho D-gliceraldeído-3-fosfato desidrogenases (GPDHs) (E.C.1.2.1.12 ) de origem renal provenientes de rim de hamster e células BHK-21 foram isoladas e purificadas. A homogeneidade da GPDH de rim foi demonstrada através de eletroforese em gel de poliacrilamida em presença de SDS, a qual apresentou uma única banda correspondente à subunidade com peso molecular de 36 Kdaltons. O pH ótimo encontrado para a enzima foi de 8,2. Os valores de Km para a GPDH de rim de hamster foram determinados para o gliceraldeído-3- fosfato e para o NAD+ sendo 0,12 mM e 0,05 mM, respectivamente. ATP, ADP, AMP, AMPc, CDP, CMP, UDP e NADH demonstraram ser inibidores competitivos com relação ao NAD+- Os reagentes sulfidrílicos p-CAB, p-CMB, p-HMB, iodoacetamida e N-etilmaleimida inibiram a atividade enzimática. As inibições causadas pelo p-CAB, p-CMB e p-HMB foram parcialmente revertidas por 2-mercaptoetanol 5 mM, porém as inibições por iodoacetamida e N-etilmaleimida foram irreversíveis. A atividade da enzima de rim também sofreu interferência da ação de íons metálicos como: MgCl2, MnCl2, CaCl2, CdCl2, CuCl2 e HgCl2. A GPDH de células BHK-21 foi purificada parcialmente até a etapa da saturação com sulfato de amónio a 90%. O pH ótimo encontrado para a atividade da enzima foi de 8,4. A concentração de arseniato de sódio para a ativação da enzima foi de 30mM. Os valores de Km encontrados para a GPDH de células BHK-21 foram de 0,05 mM para o NAD+ e 0,12 mM para o substrato (G3P), em pH 8,4. As características físico-químicas da enzima de rim não diferiram significativamente das GPDHs de outras fontes citadas na literatura.xiv, 71f. : il., grafs., tabs.application/pdfDisponível em formato digitalBioquímicaBioquímicaPurificação e caracterização da D-Gliceraldeido-3-Fosfato desidrogenase de rim de hamster e células BHK-21 (Baby Hamster Kidney)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALD - D - HELENA MARIA SIMONARD LOUREIRO.pdfapplication/pdf6697992https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/83721/1/D%20-%20D%20-%20HELENA%20MARIA%20SIMONARD%20LOUREIRO.pdff38a0634b7fb937ddf90979d4b832064MD51open access1884/837212023-08-03 15:08:17.847open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/83721Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082023-08-03T18:08:17Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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