Nocaute de proteínas positivamente reguladas nas fases iniciais da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi provoca a diminuição da capacidade proliferativa e de diferenciação do parasita
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2014 |
Tipo de documento: | Trabalho de conclusão de curso |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPR |
Texto Completo: | https://hdl.handle.net/1884/35697 |
Resumo: | Orientadora: Lyris Martins Franco de Godoy |
id |
UFPR_a27aa2e65628921f10b64ade82ae4cb9 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:acervodigital.ufpr.br:1884/35697 |
network_acronym_str |
UFPR |
network_name_str |
Repositório Institucional da UFPR |
repository_id_str |
308 |
spelling |
Santana, Sibelle SellMendonça, Márcia Helena, 1960-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências BiológicasGodoy, Lyris Martins Franco de2022-09-15T18:23:52Z2022-09-15T18:23:52Z2014https://hdl.handle.net/1884/35697Orientadora: Lyris Martins Franco de GodoyCoorientadora: Márcia Helena MendonçaMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências BiológicasResumo : A Doença de Chagas, causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi, ocorre na América Central e do Sul. Estima-se que 16 a 18 milhões de pessoas estão acometidas por esta patologia, sendo responsável por 21 mil de mortes a cada ano. Até o presente momento não há vacina ou medicamento eficiente para a sua fase crônica. O T. cruzi possui um ciclo de vida complexo, com um hospedeiro invertebrado e um hospedeiro mamífero, incluindo o homem. É na porção final do tubo digestivo do inseto que ocorre a metaciclogênese, com a diferenciação do T. cruzi de uma forma replicativa e não-infectiva (epimastigota) para uma forma infectiva e não-replicativa (tripomastigota metacíclico). Tal processo envolve alterações na expressão de diferentes genes associados com a aquisição de infectividade e virulência pelo parasita. O presente trabalho objetivou, inicialmente, a construção de cassetes de nocaute gênico, obtenção de parasitas nocaute e realização de ensaios funcionais preliminares (viabilidade celular, capacidade de proliferação e diferenciação) para quatro proteínas diferencialmente expressas durante a metaciclogênese de T. cruzi, além da pesquisa em bancos de dados e do uso de ferramentas bioinformáticas para o levantamento de domínios estruturais e informações funcionais disponíveis para as mesmas. Duas proteínas, anotadas como hipotéticas conservadas, não possuem nenhuma indicação funcional; outra tem função putativa de diidrolipoamida desidrogenase; e a última proteína, apesar de anotada como hipotética conservada, possui domínios de ligação e reconhecimento de RNA eucariótico. Análises bioinformáticas indicaram que os genes codificadores das proteínas estudadas seriam de cópia única no genoma, tornando-as passíveis de depleção por nocaute gênico. Para todas as proteínas estudadas, foram construídos cassetes de nocaute gênico para os dois alelos (quatro cassetes contendo NEO e quatro cassetes contendo HIGRO). Foram obtidos parasitas nocaute simples viáveis para as quatro proteínas. Entretanto, em função do tempo viável para execução do projeto, as demais etapas do trabalho foram direcionadas para apenas duas proteínas. Para esses dois nocautes simples foram realizados ensaios funcionais preliminares, os quais apontaram redução na capacidade proliferativa e de diferenciação e; obtidos parasitas duplos transfectantes, os quais também se apresentaram viáveis. Objetivando isolar populações clonais para estudos mais aprofundados, realizou-se o Cell Sorting em placas de 96 poços. Para uma das proteínas foram obtidas 61 colônias, enquanto para a segunda foram obtidas 72 colônias. Experimentos iniciais para confirmação do duplo nocaute dos genes de interesse demonstraram que, para a primeira proteína, apesar de confirmada a inserção dos cassetes de nocaute para os dois alelos, houve a amplificação da CDS do gene de interesse e assim, não se verificou a obtenção de nocaute duplo. Já para a segunda proteína foram observadas cinco colônias sem amplificação da CDS do gene de interesse e, assim, acredita-se que houve a obtenção de parasitas duplo nocaute. Em síntese, o presente trabalho resultou na produção de cassetes para nocaute gênico de quatro proteínas possivelmente envolvidas no processo de metaciclogênese de T. cruzi, bem como de cepas nocaute do parasita para duas delas, as quais apresentaram diminuição na capacidade de proliferação e de diferenciação. Essas cepas são de grande importância para a caracterização funcional das proteínas.1 recurso online : PDF.application/pdfExigências do sistema: Adobe Acrobat ReaderTrypanosoma cruziProteínasNocaute de proteínas positivamente reguladas nas fases iniciais da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi provoca a diminuição da capacidade proliferativa e de diferenciação do parasitainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALMONOGRAFIA SIBELLE SELL SANTANA.pdfapplication/pdf3455156https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/35697/1/MONOGRAFIA%20SIBELLE%20SELL%20SANTANA.pdf4829ff4daeaa13c9f4ae652c14977e0eMD51open accessTEXTMONOGRAFIA SIBELLE SELL SANTANA.pdf.txtExtracted Texttext/plain138232https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/35697/2/MONOGRAFIA%20SIBELLE%20SELL%20SANTANA.pdf.txteed24a4c6750f25abfece938f85e5edcMD52open accessTHUMBNAILMONOGRAFIA SIBELLE SELL SANTANA.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1266https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/35697/3/MONOGRAFIA%20SIBELLE%20SELL%20SANTANA.pdf.jpgd77d5f20d208365d6afbe8d995165aacMD53open access1884/356972022-09-15 15:23:52.317open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/35697Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082022-09-15T18:23:52Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false |
dc.title.pt_BR.fl_str_mv |
Nocaute de proteínas positivamente reguladas nas fases iniciais da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi provoca a diminuição da capacidade proliferativa e de diferenciação do parasita |
title |
Nocaute de proteínas positivamente reguladas nas fases iniciais da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi provoca a diminuição da capacidade proliferativa e de diferenciação do parasita |
spellingShingle |
Nocaute de proteínas positivamente reguladas nas fases iniciais da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi provoca a diminuição da capacidade proliferativa e de diferenciação do parasita Santana, Sibelle Sell Trypanosoma cruzi Proteínas |
title_short |
Nocaute de proteínas positivamente reguladas nas fases iniciais da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi provoca a diminuição da capacidade proliferativa e de diferenciação do parasita |
title_full |
Nocaute de proteínas positivamente reguladas nas fases iniciais da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi provoca a diminuição da capacidade proliferativa e de diferenciação do parasita |
title_fullStr |
Nocaute de proteínas positivamente reguladas nas fases iniciais da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi provoca a diminuição da capacidade proliferativa e de diferenciação do parasita |
title_full_unstemmed |
Nocaute de proteínas positivamente reguladas nas fases iniciais da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi provoca a diminuição da capacidade proliferativa e de diferenciação do parasita |
title_sort |
Nocaute de proteínas positivamente reguladas nas fases iniciais da metaciclogênese de Trypanosoma cruzi provoca a diminuição da capacidade proliferativa e de diferenciação do parasita |
author |
Santana, Sibelle Sell |
author_facet |
Santana, Sibelle Sell |
author_role |
author |
dc.contributor.other.pt_BR.fl_str_mv |
Mendonça, Márcia Helena, 1960- Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências Biológicas |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Santana, Sibelle Sell |
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv |
Godoy, Lyris Martins Franco de |
contributor_str_mv |
Godoy, Lyris Martins Franco de |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Trypanosoma cruzi Proteínas |
topic |
Trypanosoma cruzi Proteínas |
description |
Orientadora: Lyris Martins Franco de Godoy |
publishDate |
2014 |
dc.date.issued.fl_str_mv |
2014 |
dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2022-09-15T18:23:52Z |
dc.date.available.fl_str_mv |
2022-09-15T18:23:52Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/bachelorThesis |
format |
bachelorThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
https://hdl.handle.net/1884/35697 |
url |
https://hdl.handle.net/1884/35697 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.relation.requires.pt_BR.fl_str_mv |
Exigências do sistema: Adobe Acrobat Reader |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.none.fl_str_mv |
1 recurso online : PDF. application/pdf |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da UFPR instname:Universidade Federal do Paraná (UFPR) instacron:UFPR |
instname_str |
Universidade Federal do Paraná (UFPR) |
instacron_str |
UFPR |
institution |
UFPR |
reponame_str |
Repositório Institucional da UFPR |
collection |
Repositório Institucional da UFPR |
bitstream.url.fl_str_mv |
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/35697/1/MONOGRAFIA%20SIBELLE%20SELL%20SANTANA.pdf https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/35697/2/MONOGRAFIA%20SIBELLE%20SELL%20SANTANA.pdf.txt https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/35697/3/MONOGRAFIA%20SIBELLE%20SELL%20SANTANA.pdf.jpg |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
4829ff4daeaa13c9f4ae652c14977e0e eed24a4c6750f25abfece938f85e5edc d77d5f20d208365d6afbe8d995165aac |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR) |
repository.mail.fl_str_mv |
|
_version_ |
1801860357340266496 |