Análise de neurônios gabaérgicos parvalbumina-positivos em áreas sensoriais no modelo animal de autismo induzido por exposição pré-natal ao ácido valproico

• Autor(a) principal: Machado, Júlio Santos Terra
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/218378
• topic: Transtorno do espectro autista; Ácido valpróico; Modelos animais de doenças; Ácido gama-aminobutírico; Neurônios GABAérgicos; Parvalbuminas; ASD; Excitatory/inhibitory balance; Immunofluorescence; Parvalbumin; Animal model; Sensory system

O Transtorno do Espectro Autista é uma desordem do neurodesenvolvimento caracterizada, segundo o DSM-V, por uma díade comportamental: déficits de comunicação e interação social além de comportamentos repetitivos ou estereotipados. Outro aspecto de extrema importância para o transtorno são as alterações sensoriais presentes em mais de 90% dos indivíduos, tais como hiperresponsividades a estímulos não nocivos (visuais, táteis, auditivos) e hiporresponsividade a estímulos nocivos, que implicam em prejuízo na qualidade de vida. Apesar da etiologia do autismo não ser conhecida, tanto fatores genéticos quanto ambientais já foram associados à desordem, incluindo a utilização de ácido valproico (VPA) durante a gestação – situação que aumenta significativamente a chance do desenvolvimento de autismo nos filhos. Baseado nessas observações, desenvolveu-se um modelo animal de autismo induzido por exposição pré-natal ao VPA, validado pela identificação de diversas características (comportamentais, morfológicas e moleculares) do tipo autista. No presente trabalho, realizou-se uma análise quantitativa e organizacional de interneurônios GABAérgicos positivos para parvalbumina em regiões associadas com processamento sensorial – Área Somatossensorial Primária (ASSP) e Região da Amígdala (RAM). A obtenção dos animais passou por um processo inicial de acasalamentos, onde a verificação da fecundação foi comprovada através da identificação de espermatozoides no líquido vaginal na manhã posterior ao pareamento. As fêmeas do grupo VPA foram induzidas com uma injeção intraperitoneal de VPA (600mg/kg) no E12,5. Filhotes machos com 30 dias foram anestesiados e perfundidos com paraformaldeído 4% para promover a fixação tecidual, após a eutanásia relizou-se a remoção do encéfalo, posteriormente preservado em Tissue-Tek® a -80ºC. O tecido foi cortado em criostato e as fatias contendo as estruturas de interesse foram identificadas através do atlas Paxinos. Realizou-se imunofluorescência com objetivo de obter três marcações: DAPI, NeuN e Parvalbumina (PV). As imagens foram obtidas por microscopia confocal e processadas no software ImageJ com o plug—in Cell Counter. A análise estatística foi realizada no software Graph Pad Prims 5, utilizando o Teste t de Student seguido de correção de Welch, considerando p<0,05 como significativo. Na ASSP o grupo VPA exibiu, além de severa desorganização laminar, redução significativa na quantidade de células não-neuronais na camada IV-V (1,26x), demonstrando um prejuízo em células gliais, essenciais para a manutenção da homeostase local, além disso, a quantidade e a densidade de neurônios PVpositivos também demonstraram redução significativa na camada IV-V (3,06x), enquanto na camada II-III (1,69x) houve um aumento significativo. Complementarmente, a análise de todas as camadas em conjunto não apresentou diferenças significativas para nesses parâmetros, demonstrando uma possível alteração na migração desses interneurônios entre as camadas corticais. Na Região da Amígdala, houve redução significativa do número e densidade de interneurônios PV+ no grupo VPA (2,66x) Considerando os dados apresentados, nós demonstramos pela primeira vez que a exposição pré-natal ao VPA induziu importantes alterações nas camadas corticais da ASSP e na RAM no que se refere a células não neuronais e neurônios inibitórios PV+. Esses prejuízos no componente inibitório provavelmente resultam em expressivas consequências no balanço excitatório/inibitório que poderiam explicar diversas alterações comportamentais identificadas.