Interferência de Bacteroides thetaiotaomicron no crescimento e virulência de Escherichia coli enteroagregativa

• Autor(a) principal: Barcellos, Isadora Silva
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRJ
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11422/19164
• topic: Bacteroides thetaiotaomicron; Escherichia coli; Microbiota; Virulência; Virulence; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA

Bacteroides thetaiotaomicron é um membro da microbiota das membranas mucosas, especialmente do trato intestinal de humanos. Estudos recentes demonstraram sua capacidade de interferir na expressão de genes de virulência de patógenos entéricos, sugerindo que componentes da microbiota e seus produtos metabólicos podem influenciar significativamente na patogenicidade de patógenos como E. coli. E. coli enteroagregativa (EAEC) é um enteropatógeno emergente constantemente associado a diarreias agudas ou persistentes e inflamação intestinal crônica em adultos e crianças. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo investigar a interferência dos produtos metabólicos de B. thetaiotaomicron presentes no seu sobrenadante, no crescimento e na virulência do patotipo EAEC. Inicialmente, o crescimento de uma cepa padrão de EAEC na presença do sobrenadante de B. thetaiotaomicron foi acompanhado por análise espectrofotométrica (DO600nm) em anaerobiose durante 9 h, sendo observada alteração significativa em relação a cepa cultivada na ausência do sobrenadante. Como a adesão aos enterócitos é extremamente importante para o estabelecimento e persistência de EAEC, foram realizados ensaios de adesão qualitativo e quantitativo da cepa padrão à células HEp-2 e ensaios de adesão a laminina de camundongo em lamínulas de vidro, na presença e ausência do sobrenadante de B. thetaiotaomicron, com inóculo inicial de 0,5 (DO600nm) e 5x107 respectivamente. A adesão às células HEp-2 sofre variações quantitativas quando a cepa de EAEC é cultivada com sobrenadante de B. thetaiotaomicron (1,3 x 1011 UFC) em relação ao controle (4,56x1010 UFC). A aderência a laminina foi quantificada através da captura de 10 imagens de campos aleatórios de cada lamínula [Campo de visão (CV) = 0,30mm2]. A adesão a laminina é aumentada quando a cepa é cultivada com sobrenadante de B. thetaiotaomicron (604,3 UFC/CV) em relação a cepa cultivada na ausência do sobrenadante (500,73 UFC/CV). Ambas condições foram comparadas com seus respectivos controles (BSA 2%), quantificados em 49,11 UFC/FV e 96,58 UFC/CV, respectivamente. Com base nesses testes foi investigado a produção de biofilme em ambas condições de cultivo da cepa padrão e cepas clínicas de EAEC em que a maioria das cepas foram caracterizadas como fortes (> 1) e moderada (0,79) produtoras de biofilme quando cultivadas com sobrenadante de B. thetaiotaomicron. Também foram realizados testes de motilidade a partir do cultivo das cepas com sobrenadante de B. thetaiotaomicron, no qual a motilidade diminuiu cerca de 6 vezes. Esses resultados permitem inferir que o sobrenadante de B. thetaiotaomicron é capaz de interferir significativamente nos principais fatores de virulência de EAEC. Estudos adicionais tornam-se necessários para caracterizar metabólitos específicos na tentativa de elucidar as interações interespécies de patógenos e comensais no ambiente intestinal, que possam estar envolvidos na persistência e/ou comportamento virulento dessa espécie.